Ген апо В: полиморфизм 5' концевой области
Проведен анализ минисателлитного повтора, расположенного в 3' концевой области гена аpо В и установлена корреляция между отдельными аллельными вариантами этого повтора и развитием ИБС в московской популяции [ Погода Т.В. и др., 1995 ]. В этой связи было интересно провести исследования 5' концевой области гена аpо В, для изучения которой было использовано два полиморфных маркера. Один из них - это динуклеотидный (CA)n повтор, расположенный во фланкирующей части гена аpо В на расстояние 3 т.п.н. от сайта инициации транскрипции. Вполне возможно, что его аллельные варианты могут быть сцеплены с вариантами промоторной области, влияющими на уровень транскрипции. В качестве второго был выбран инсерционно-делеционный полиморфизм сигнального пептида , связанный с делецией трех кодонов Лей-Ала-Лей в положении -14/-16. Можно сделать предположение, что изменения структуры сигнального пептида могут влиять на транспорт аpо В через мембраны клетки и тем самым вовлекаться в патогенез ИБС [ Collins D.R. et al., 1988 , Vogler G.P. et al., 1989 ].
При анализе (CA)n повтора было идентифицировано 4 аллельных варианта - от (СА)13 до (СА)16. Пример определения аллельных вариантов приведен на рис. 1 . Частота встречаемости выявленных аллелей представлена в табл. 6 , в которой также приведены данные, полученные для австрийской популяции [ Ludwig E.H. et al., 1990 ].
Как видно из табл. 6 аллели с 14 и 15 повторами наиболее часто встречаются в обеих популяциях и являются мажорными. Варианты с 13 и 16 повторами встречаются намного реже и относятся к классу минорных аллелей. Следует отметить, что в австрийской популяции были выявлены аллели содержащие 12, 17, 18 повторов, не обнаруженные в московской популяции. Это, по- видимому, связано с редкой частотой данных аллельных вариантов и меньшим объемом проанализированной московской выборки. Распределение мажорных (СА)14, (СА)15 и минорных (СА)13, (СА)16 вариантов в московской популяции в случайной выборке практически не отличается от распределения этих вариантов в группе больных ИБС . Не наблюдается также каких-либо существенных различий между частотой встречаемости идентифицированных в московской популяции аллелей и частотой этих аллелей в австрийской популяции ( табл. 6 ). Полученные данные позволяют утверждать, что этот полиморфизм не ассоциирован с развитием ИБС в московской популяции.
При сравнении наиболее сильно отличающейся частоты аллеля D в случайной выборке (0, 31) и в группе больных ИБС с высоким уровнем аpо В (0, 43) (2 равен 1, 13 (р(0, 25). Следует отметить, что частота аллелей I и D в московской популяции при этом очень близка к частоте этих аллелей в популяции г. Санкт- Петербурга [ Шевцов С.П. и др., 1994 ]. Так, в случайной выборке в Москве и в контрольной выборке в Санкт-Петербурге частота аллеля I равна соответственно 0, 69 и 0, 67.
Так как инсерционно-делеционный полиморфизм, вероятно, может оказывать влияние на характер липидного обмена , был проведен анализ уровня ряда параметров липидного спектра плазмы крови : общего холестерина ( ОХ ), холестерина липопротеинов высокой плотности ( ХЛВП ), холестерина липопротеинов низкой плотности ( ХЛНП ), триглицеридов ( ТГ ), и аpо В у лиц с генотипами II, ID, DD в случайной выборке и у больных ИБС . Результаты данного анализа приведены в табл. 8 . Из представленных данных видно, что уровень ОХ, ХЛВП, ХЛНП, ТГ, аpо В достоверно не отличается у лиц с различными генотипами в обеих выборках.
Таким образом, в московской популяции не наблюдается ассоциации между данным полиморфизмом, развитием ИБС и отдельными характеристиками липидного обмена. В этом плане московская популяция близка к белому населению США - в этой популяции также не обнаружено ассоциации такого типа [ Hixson J.E. et al., 1992 ].
Однако в ряде популяций I/D полиморфизм сигнального пептида оказался функционально важен. Например, обнаружена ассоциация аллеля D с развитием ИБС у американских чернокожих [ Hixson J.E. et al., 1992 ] и в популяции Тайваня [ Wu J.N. et al., 1994 ], в Швеции отмечается связь болезни с инсерцинном аллелем (I) [ Peackock R. et al., 1994 ].
Продемонстрирована ассоциация аллеля D: с уровнем ОХ - у индусов, живущих в Лондоне [ Hansen P.S. et al., 1994 ], во французской популяции [ Visvikis S. et al., 1984 ] и у датчан [ Hansen P.S. et al., 1994 ]; с уровнем ХЛНП - у норвежцев [ Hansen P.S. et al., 1994 ]; с уровнем ЛНП - во французской популяции [ Visvikis S. et al., 1984 ]. Такое различие в результатах, по- видимому, связано с тем, что инсерционно-делеционный полиморфизм сигнального пептида сам по себе не влияет на синтез, секрецию или функциональные свойства апо В. Ассоциации, которые наблюдаются в отдельных популяциях, обусловлены скорее всего сцеплением данного полиморфизма с какими-то функционально значимыми мутациями гена аpо В.
Необходимо отметить, что при изучение тех же самых выборок из московской популяции была обнаружена ассоциация между развитием ИБС, отдельными липидными характеристиками и полиморфизмом VNTR повтора в 3' нетранслируемой области гена аpо В [ Погода Т.В. и др., 1995 ]. Существует ряд данных о наличии такой связи с VNTR полиморфизмом, а также целым рядом рестрикционных полиморфных сайтов (Xba I, EcoR I, Pvu II, Rsa b, Msp I) в 3' концевой области в других популяциях [ Погода Т.В. и др., 1995 , Deeb S. et al., 1986 , Galtion D.J. et al., 1995 , Geneset J.J. et al., 1988 , Genest J.J. et al., 1990 , Monsalve M.V. et al., 1988 , Paulweber B. et al., 1990 ]. Pезультаты работы по поиску ассоциации между ИБС и полиморфными вариантами 5' концевой области гена аpо В оказались отрицательными. В совокупности все это указывает на то, что скорее всего ведущее значение для определения роли аpо В в развитии ИБС имеет структура 3', а не 5' концевой области аpо В. Это может быть связано с тем, что наиболее значимым для нормальной функции аpо В является домен связывания с рецептором ЛНП, который кодируется экзоном 26, расположенным в 3' концевой области гена аpо В, и наблюдаемые ассоциации указывают на наличие неравновесного сцепления между какими-то мутациями в этом домене и полиморфными сайтами, расположенными в непосредственной близости от экзона 26 или в самом экзоне 26. Высокая функциональная значимость именно этого экзона подтверждается тем, что в нем обнаружена мутация в кодоне 3500, вызывающая семейную гиперхолестеринемию [ Никонова А.Л. и др., , Weisgraber K. et al., 1988 ].
