Мутагенез у цианобактерий: транспозоны
Мутагенез с использованием транспозона Tn901 , кодирующего бета-лактамазу, сыграл важную роль в распространении методики трансформации цианобактерий из России в лаборатории других стран мира. Так, van den Hondel ввел транспозон Tn901 в природную плазмиду Synechococcus и трансформировал полученной плазмидной конструкцией клетки этой цианобактерии [ van den Hondel C.A.M.J.J., et al. 1980 ]. Проведена транспозиция Tn901 из плазмиды в хромосому как способ мутагенеза хромосомных локусов [ Kuhlemeier C.J., et al. 1981 , Tandeau de Marsac N., et al. 1982 ]. Показано также, что транспозон Tn5 может перемещаться в нитчатой азотфиксирующей цианобактерии Anabaena [ Borthakur D., Haselkorn R. 1989 ]. Однако использование этого транспозона становится намного более эффективным с введением в эксперимент его вариантов, например, Tn5-1058 и родственных ему конструкций. Варианты Tn5 имеют, во-первых, намного более сильный промотор, запускающий траскрипцию оперона, несущего гены устойчивости к антибиотикам, во-вторых, более высокую частоту транспозиции и, в-третьих, начало репликации (ориджин репликации) Escherichia coli внутри транспозона. Такие конструкции позволяют клонировать последовательности ДНК, прилежащие к транспозону, путем разрезания геномной ДНК рестриктазами, не имеющих сайтов узнавания внутри транспозона, замкнуть в кольцо такую молекулу ДНК с помощью лигирования in vitro и трансформировать полученной лигазной смесью клетки Escherichia coli [ Black T.A., et al. 1993 , Cai Y., Wolk C.P. 1997 , Ernst A., et al. 1992 , Wolk C.P., et al. 1991 ]. Показано, что транспозон Tn5-692 увеличивает транспозицию примерно в сто раз, давая большое количество транспозонных мутантов цианобактерии Sуnechococcus PCC 7942 [ Koksharova O.A., Wolk C.P. 2002 ].
Недостатком использования транспозонного мутагенеза могут быть иногда повторные транспозиции.
