p53 белок: Роль в репликации
В 1979 году было обнаружено, что р53 может блокировать репликацию вируса SV40 , связывая и инактивируя большой Т-антиген ( Lane and Crawford, 1979 ), и, возможно, конкурировать с ДНК- полимеразой за связывание с Т-антигеном ( Gannon et al., 1987 ).
В процессе синтеза ДНК Т-антиген выступает как хеликаза ; р53 подавляет эту активность ( Sturzbecher et al., 1988 ). Следовательно, р53 может взаимодействовать с клеточными белками, аналогами большого Т-антигена SV40 и подавлять репликацию ДНК в клетке, подвергшейся, например, ДНК-повреждающим воздействиям .
Однако р53 может ингибировать активность большого Т антигена, действуя как антихеликаза. Известно, что р53 усиливает реассоциацию цепей ДНК и РНК ( Oberosler et al.,1993 ; Brain et al., 1994 ), действуя таким образом как антихеликаза. In vitro р53 дикого типа может связывать однонитевые концы ДНК и катализировать ренатурацию коротких комплементарных цепей ДНК ( Bakalkin et al., 1994 ).
Способность р53 связываться с белком RP-A (известным как белок, связывающийся с одноцепочечной ДНК в репликационной вилке), является примером взаимодействия р53 с белками, непосредственно участвующими в репликации ( Dutta et al., 1993 ). Однако, надо отметить, что некоторые мутанты р53 также способны связывать RP-A.
Прямое участие р53 в ингибировании репликации ядерной ДНК было показано в экспериментах с использованием очищенного белка р53 человека и экстрактов клеток Xenopus laevis, компетентных в отношении инициации и элонгации репликации ядерной ДНК ( Cox et al., 1995 ). р53 ингибирует инициацию репликации эукариотической ядерной ДНК и для этого ингибирования не требуется его транскрипция. Интересно, что способностью ингибировать синтез ДНК обладал делеционный мутант (делеция в С-концевой части молекулы), в то время как полноразмерная форма белка не проявляла такой активности ( Cox et al., 1995 ).
р53 ингибирует репликацию ДНК непосредственно в момент инициации или на самых ранних стадиях этого процесса. Вероятно, р53 не мешает процессу репликативного синтеза на стадии элонгации, во всяком случае р53 не блокировал репликацию ДНК фага М13 с заранее отожженым праймером.
Способность к ингибированию репликации коррелирует с ДНК-связывающей способностью р53 (мутанты, утратившие способность к ДНК связыванию, одновременно утратили способность к супрессии репликации). В то же время при введение в систему олигонуклеотидов, содержащих консенсусы связывания для р53, изменений в уровне ингибирования репликации не наблюдалось. Либо взаимодействие р53 и ДНК в репликативной вилке значительно прочнее, чем взаимодействие р53 с олигонуклеотидами, либо при репликации р53 взаимодействует с другим отличным от консенсуса связывания классом ДНК (например, ориджин репликации) ( Cox et al., 1995 ).
