ген и мРНК Пролактина гипофиза быка
Исследованный и секвенированный фрагмент гена пролактина быка ( Camper S.A. ea, 1984 ) включает экзоны 1 и 2, и 474 п.о. 5'-фланкирующей области, район которой от -1 до -360 высокогомологичен (79%) соответствующему участку гена пролактина крысы . Сайт инициации транскрипции был определен гибридизацией гипофизарной поли(A)-мРНК с меченным фрагментом кДНК, достройкой обратной транскриптазой и последующей оценкой размеров ревертированных фрагментов мРНК в денатурирующем геле ( Camper S.A. ea, 1984 ). В 28 нуклеотидах от старта транскрипции находится TATA-бокс, определенный авторами как 5'-TATAA-3'(-27/-23) ( Camper S.A. ea, 1984 ). Обычно в генах эукариот последовательности TATA- и CAAT-бокса, являющиеся частью эукариотического промотора, располагаются примерно в 30 ( Corden S. ea, 1980 ) и 70-80 ( Benoist C. ea, 1980 ) нуклеотидах от старта транскрипции, соответственно.
По данным Camper S.A и сотрудников ( Camper S.A. ea, 1984 ) в гене пролактина быка не найдено последовательности, гомологичной консенсусу CAAT-бокса, так же, как сначала считалось для гена пролактина крысы ( Cooke N.E. ea, 1982 ). Однако на позиции -111/-103 ( Camper S.A. ea, 1984 ), на 23 нуклеотида дальше, чем обычно, находится последовательность 5'- GG(G)TAATCT-3', идентичная аналогичному фрагменту промоторной области гена пролактина человека (-113/-105) ( Truong A.T. ea, 1984 ) и гомологичная консенсусу CAAT-бокса на 78%.
Сравнение с нуклеотидной последовательностью мРНК пролактина быка ( Sasavage N.L. ea, 1982 ) выявило, что 13 нуклеотидов с 5'-конца кДНК отсутствуют в последовательности гена и являются артефактом клонирования кДНК ( Camper S.A. ea, 1984 ). Если не считать эти 13 п.о., то мРНК пролактина быка состоит из 54 п.о. 5'-нетранслируемой области; 690 п.о., кодирующих препролактин (включая терминирующий кодон); и 150 п.о. 3'- нетранслируемой области ( Sasavage N.L. ea, 1982 ). Как и у человека ( Cooke N.E. ea, 1981 ), последовательность пролактина быка состоит из 199 аминокислотных остатков, а сигнальный пептид на 2 а.к. больше (30 а.к.о.)( Sasavage N.L. ea, 1982 ).
Sasavage N.L. и соавторы ( Sasavage N.L. ea, 1982 ) отмечают, что мРНК пролактина быка кодирует в 31 положении гормона аспарагиновую кислоту Asp- 31-Leu-Ser-Ser вместо аспарагина Asn-31-Leu-Ser-Ser, как было до этого известно из данных по секвенированию белка. Интересно заметить, что в гипофизе млекопитающих присутствует гликозилированная форма пролактина, в которой единственная в молекуле углеводная цепь присоединена именно к Asn- 31 аминокислотному остатку ( Бутнев В.Ю. и др., 1987 ). Установлено, что гликозилированный свиной пролактин обладает повышенной лактогенной активностью ( Бутнев В.Ю. и др., 1987 ).
Таким образом, показанная Sasavage N.L. и соавторами ( Sasavage N.L. ea, 1982 ) замена приводит к тому, что потенциальный сайт гликозилирования пролактина быка нарушается и больше не удовлетворяет консенсусной последовательности Asn-notPro-Ser/Thr-notPro сайтов гликозилирования белков . Классический сигнал полиаденилирования 5'-AATAAA-3' расположен в 28 нуклеотидах от поли-A конца мРНК пролактина быка ( Sasavage N.L. ea, 1982 ).
