Простагландин-H2 E-изомераза: каталитические свойства изоформ
Установлены различия в каталитических свойствах изоформ простагландин-H2 E-изомеразы . Оба фермента требовали наличия глутатиона для проявления каталитической активности, однако для достижения максимальной активности низкомолекулярным ферментом требовалась его более высокая концентрация (2мМ), чем в случае использования высокомолекулярного фермента (<0.5мм). ="PGG в 15-гидроперокси-PGE. При использовании в качестве субстратов PGG1 и PGG2 скорость реакции была почти в 2 раза ниже, чем в случае использования PGH1 или PGH2 . При этом значения KM равнялись 10мкМ для PGH1 и 50мкМ для PGG1.
Для простагландин-H2 E-изомераз из различных источников показано, что они проявляют каталитическую активность только в присутствии GSH ( Miyamoto, 1974 ; Sheng, 1987 ), но не другого тиола. При этом экспериментально было показано ( Ogino, 1977 ), что GSH не расходуется в ходе реакции. основываясь на этих результатах, было сделано предположение, что в изомеразной реакции GSH выполняет ту же роль, что и в реакции, катализируемой гидроксилазой I . Согласно этому механизму GSH взаимодействует с C9 атомом PGH2, способствуя 1,2-водородной перегруппировке, приводящей к образованию 9-кето,11-гидроксиструктуры, характерной для производных PGE .
Для катализируемой ферментом реакции изомеризации, видимо, необходимо также наличие свободной SH-группы в активном центре фермента, поскольку реагенты, способные блокировать сульфгидрильные группы ( хлорид ртути , p- хлормеркурийбензоат ), вызывают дозозависимое ингибирование простагландин- H2 E-изомераз ( Ogino, 1977 ; Sheng, 1987 ). Основываясь на том, что простагландин-H2 D-изомераза проявляет близкие свойства, можно предположить, что эти два типа простагландин-H2 изомераз имеют сходный механизм действия и для реакции изомеризации 9,11-эндопероксидной группы в молекуле PGH2 необходимо наличие внутренней (остаток Cys в активном центре) и внешней (GSH или другой тиол) сульфгидрильных групп.
