Зависящее от гомологии подавление IES у Paramecium
Если делеция или сохранение клеточных генов контролируются путем сравнения содержания соматического генома и генома зародышевой линии, тогда даже эффективная в норме эксцизия IESs могла бы, возможно, нарушаться, когда копии присутствуют в материнском макронуклеусе. Изучение менделевской мутации, mtFE , обладающей плейотропными влияниями на развитие макронуклеуса, в том числе влиянием на детерминацию типа спаривания ( Brygoo and Keller, 1981a , Brygoo and Keller, 1981b ), дало возможность проверить это предсказание. Оказалось, что эта мутация, будучи в гомозиготном состоянии, отменяет вырезание IES-последовательности, локализованной в гене поверхностного антигена G. Удивительно, но когда аллель дикого типа гена mtF была реинтродуцирована в мутантный штамм в результате конъюгации, эта IES все еще не вырезалась в ходе последующего развития макронуклеуса ( Meyer and Keller, 1996 ). Генетический анализ получившегося в результате вариантного штамма, названного штамм IES+, подтвердил, что генетически он является диким типом и что специфическое сохранение этой IES наследуется по материнской линии в половом потомстве ( Duharcourt et al., 1995 ).
Является ли эксцизия IES в развивающихся макронуклеусах индуцированной материнскими копиями корректно перестроенного гена G или же ингибированной материнскими копиями сохраняющего IES гена G? Чтобы ответить на этот вопрос, макронуклеусы клеток IES+ или IES были трансформированы с помощью прямой микроинъекции плазмид, содержащих фрагмент кодирующей последовательности G в ее микронуклеарной (IES+) или макронуклеарной (IES) версиях ( рис. 7.8 ) ( Duharcourt et al., 1995 ). После автогамии трансформированные клоны, содержавшие плазмиду IES+, дали линии потомков, которые сохранили IES в своих вновь сформировавшихся макронуклеусах, тогда как клетки IES+, трансформированные плазмидой IES , оказались неспособными индуцировать эксцизию, и их потомство оставалось в состоянии IES+. Плазмида, содержавшая только IES, без каких-либо фланкирующих последовательностей, также вызывала сохранение IES, показывая тем самым, что одни только материнские копии IES подавляют эксцизию из материнских макронуклеусов ( Duharcourt et al., 1995 ).
