G-CSFR (Г-КСФР): Функциональные домены цитоплазматической области
Передача сигнала с поверхности клетки в ядро опосредуется различными доменами цитоплазматической области Г-КСФР и представляет собой многоступенчатый процесс, завершающийся активацией транскрипционных факторов, функционирующих непосредственно в ядре клетки. Ранние исследования по молекулярному анализу Г-КСФР и путям передачи сигнала обобщены в 1996 г. [ Avalos ea 1996 ]. Цитоплазматическая область Г-КСФР дикого типа состоит из 183 АКО и подразделяется на мембрано-проксимальную часть, содержащую два консервативных субдомена, известных как боксы 1 и 2, и мебрано-дистальную часть, в состав которой входит менее консервативная последовательность - бокс 3 (см. рис. 3 ). Мутационный анализ рецептора показал, что домен из 57 АКО мембрано-проксимальной части, включая боксы 1 и 2, достаточен для пролиферации миелоидных клеток . Однако для максимального пролиферативного ответа необходимы приблизительно 100 мембрано-проксимальных АКО, так как последовательность из 30 АКО (56-85) существенно усиливает рост. Мембрано-дистальная или С-концевая часть (98 АКО) опосредует сигналы, супрессирующие рост, и обеспечивает дифференцировку и терминальное созревание гранулоцитов, хотя для передачи сигналов созревания необходима также и мембрано-проксимальная часть цитоплазматической области рецептора.
Наличие дискретных функциональных внутриклеточных доменов рецептора, а также существование ряда его природных изоформ, отличающихся, в основном, по цитоплазматическим последовательностям, позволили предположить, что различные области рецептора взаимодействуют с различными специфическими молекулами, что и приводит к разнообразию биологических эффектов Г-КСФ. К настоящему времени идентифицированы множество сигнальных белков, наиболее важные из которых включают тирозинкиназы Janus-семейства ( Jak1 , Jak2 и Tyk2 ), киназы Src-семейства ( Lyn , Hck и Syc ), семейство цитоплазматических транскрипционных факторов Stat и компоненты пути передачи сигнала Ras-Raf-Map . Предложена модель [ Avalos ea 1996 ] передачи сигнала при пролиферации с помощью многокомпонентного пути Ras-Raf-Map и более прямого пути Jak-Stat ( рис. 6 ), которые относительно автономны, хотя не исключено, что они пересекаются как между собой, так и с другими сигнальными каскадами.
Разработан ряд подходов и методов исследования гранулоцитопоэза, включая получение новых мутантов рецептора, неактивных мутантов сигнальных белков, клеточных линий, дефицитных по различным сигнальным белкам, и нокаутных (knockout) мышей с направленно удаленными генами тех или иных белков. И хотя при использовании упомянутых подходов существует ряд проблем, иногда затрудняющих интерпретацию полученных результатов, в общем удалось подойти к более детальному выяснению механизма регуляции не только пролиферации, но и дифференцировки, созревания, выживания и функциональной активации клеток нейтрофильного ряда, а также биологической роли различных сигнальных белков, что рассмотрено ниже.
