Аллель-специфическая ПЦР: диагностика мутации Leiden
На рис. II.34 представлена схема аллель-специфической ПЦР, использованной для диагностики мутации Leiden при тромбофилиях .
Мутация локализована в экзоне 10 гена фактора V системы свертывания крови человека и часто ассоциирована с синдромом повышенной ее свертываемости . В соответствии с последовательностью нуклеотидов анализируемого участка генома синтезируют два праймера, 3'-концевой нуклеотид одного из которых комплементарен мутантному нуклеотиду матричной ДНК, а у другого - нуклеотиду дикого типа (см. рис. II.34,а,б ).
Для усиления специфичности действия праймеров вблизи их 3'- концов были введены некомплементарные матрице нуклеотиды. Для исключения ложноотрицательных результатов в пробах, где продукт ПЦР отсутствует, повышали число циклов ПЦР сверх оптимального, после чего, если система работает нормально, продукт ПЦР появляется и в этих пробах, что может служить дополнительным внутренним контролем.
