Щелочной гидролиз модифицированного по Ser52 микроцина
Щелочной гидролиз модифицированного по Ser52 микроцина подтверждает наличие сложноэфирной связи в микроцине "X".
Присутствие функциональной группы с высокой реакционной способностью в боковой цепи Ser52 согласовывалось с идеей формирования сложноэфирной (N-O пептидной связи) в микроцине X между Cys51 и Ser52. Такая связь должна быть чувствительной к мягкому щелочному гидролизу. Продукты реакций модификации X- и N-форм микроцина N-гидроксисукцинимидным эфиром биотина при pH 4 были инкубированы в 10% водном аммиаке, полученные вещества проанализированы с помощью MALDI ( рис. 19 ). Непрореагировавшее вещество N не гидролизуется, но подвергается деамидированию (изменение массы на 2 единицы). Деамидирование происходит по двум остаткам аспарагина и было ранее показано Parks et al [ 23 ]. Более сложная картина наблюдается при анализе продуктов гидролиза биотинилированного вещества X. Оставшееся непрореагировавшее вещество деамидировалось и, по данным MS-MS, изомеризовалось в вещество N. Интенсивность пика монобиотинилированного X во много раз уменьшилась, при этом появилось два новых пика. Пик (m/z=1701.7) соответствовал амидированному по С-концу N-концевому фрагменту микроцина, образовавшемуся в результате разрыва связи Cys51->Ser52. Пик (m/z=1639.6) соответствовал С-концевому фрагменту микроцина, биотинилированному по Ser52. Аналогичные результаты были получены и при гидролизе продуктов реакции модификации пропионовым ангидридом.
Данные результаты подтверждают наличие сложноэфирной связи между остатками Cys51 и Ser52 в микроцине Б X-типа. Эта связь не присутствует в микроцине N-типа. Нужно отметить, что гидролиз моно- модифицированного микроцина X не является следствием модификации per se, так как ни одна из моно-модифицированных производных вещества N не гидролизовалась. Таким образом, основываясь на приведенных выше данных, мы заключаем, что большая часть микроцина Б, выделяемого из клеток по стандартной процедуре, имеет структуру, отличающуюся от представленной на рис. и содержит сложноэфирную пептидную связь - продукт N-O ацильного сдвига Ser52. В результате данной изомеризации боковой радикал Ser52 содержит аминогруппу вместо гидроксильной.
