Рис. 65.30(Harrison). Обратный дот-блоттинг
Обратный дот-блоттинг с аллель-специфическими олигонуклеотидными зондами для разных точечных мутаций, вызывающих муковисцидоз.
На мембрану наносили аллель-специфические олигонуклеотидные зонды: слева для нормального аллеля, справа - для мутантного, а затем с ними гибридизовали продукт ПЦР.
Положение зондов обозначено следующим образом: F и дельта для мутации дельтаF508, G и Х для G542X, G и D для G551D, R и Х для R553X, N и К для N1303К, 10, 11 или 21 в контрольной группе для выявления амплификации соответствующих экзонов.
Мутации обозначены в соответствии с принятой номенклатурой с использованием однобуквенного аминокислотного кода. Сначала пишут код аминокислоты, присутствующей в нормальном белке, затем ее положение в молекуле белка и код новой аминокислоты. Так, G551D означает замену глицина (G) на аспарагиновую кислоту (D) в положении 551.
X - терминирующий кодон.
Дельта F508 - делеция фенилаланина (F) в положении 508.
Буквы справа обозначают людей со следующими генотипами:
- А - мутации отсутствуют;
- Б - сложная гетерозигота дельтаF508/G542X;
- В сложная гетерозигота дельтаF508/R553Х;
- Г - гетерозигота по G542X;
- Д - гетерозигота по G55I D;
- Е гетерозигота по R553X;
- Ж - гетерозигота по N 1303К.
