Il-2 Ген: сайты связывания фактора NFAT-1
Фактор NFAT-1 присутствует только в ядерных экстрактах индуцированных Т-клеток, появляясь через 10-25 минут после начала активации. В клеточной линии Jurkat связывание данного фактора зависит от белкового синтеза [ Shaw,J.P., P.J.Utz, ea, 1988 , Brunvand M.W., Schmidt A., ea, 1988 , Shibuya H., Taniguchi T., 1989 ].
Все рассмотренные факторы участвуют в позитивной регуляции транскрипции гена IL-2. При анализе делетационных мутаций в 5'-фланкирующих областях гена IL-2 человека не было найдено негативных регуляторных элементов, так как ни один из мутантов не показал увеличения САТ активности по сравнению с диким типом. Однако, негативные и позитивные регуляторные участки гена могут перекрываться. Частичная делеция такой негативной регуляторной последовательности может маскироваться одновременной делецией позитивного участка регуляции, поэтому для выявления негативных регуляторных областей гена IL-2 использовались другие методы.
Интересные результаты были получены в работе [ Mouzaki,A., ea, 1991 ], где ген IL-2 инъецировали в ооциты, после чего измеряли уровень экспрессии IL-2. Экспрессия уменьшалась при добавлении экстрактов из покоящихся Т-клеток селезенки и увеличивалась при использовании экстрактов из активированных Т-клеток. Экстракты из клеток других типов не влияли на уровень экспрессии IL-2. Используя сайт-направленный мутагенез промоторной области гена IL-2, авторы показали, что последовательности-мишени для факторов из экстрактов как активированных, так и отдыхающих Т-клеток, находятся в участке связывания фактора NFAT-1 (от -292 до -261).
В экстрактах отдыхающих клеток селезенки содержался единственный белок, связывающийся с этой областью ( сайленсер ), в то время как активированные Т-клетки продуцировали два белка (силенсер и активатор).
Таким образом, в покоящихся Т-клетках существует IL-2 специфический репрессор транскрипции , причем дерепрессия гена происходит после появле- ния в индуцированных Т-клетках белка-активатора. Вероятно, что описанный белок-активатор тождественен NFAT-1 . Природа белка-репрессора никак не уточнялась.
Другая область негативной регуляции была обнаружена с помощью модельных конструкций, содержащих промотор SV-40 , 5'-фланкирующую область гена IL-2 (от -145 до +39) и CAT ген. Было показано, что изменение последовательности нуклеотидов в области сайта связывания NF-IL2A (от -77 до -71) приводит к повышению уровня экспрессии САТ гена в покоящихся, но не активированных Т-клетках [ Nabel G.J., Gorka C., ea, 1988 ]. Возможно, что сайт связывания NF-IL2A также способен связывать несколько факторов (репрессоров или активаторов), в зависимости от состояния Т-клеток.
Кроме описанных выше факторов, многими исследователями отмечалось, что 5'-фланкирующая область гена IL-2 связывает и другие функционально-важные белки, однако, природа этих факторов никак не уточнялась [ Brunvand M.W., Schmidt A., ea, 1988 , Shibuya H., Taniguchi T., 1989 , Durand,D.B., J.-P.Shaw, ea, 1988 , Nabel G.J., Gorka C., ea, 1988 ]. Очевидно, что для выяснения механизма регуляции транскрипции гена IL-2 необходимо структурно и функционально охарактеризовать все факторы, взаимодействующие с 5'-фланкирующей областью гена IL-2.
