Инфекции, вызываемые Chlamydia trachomatis: лабораторная диагностика
В лабораторной диагностике хламидиоза и венерической лимфогранулемы применяют четыре группы методов:
- микроскопия соскобов со слизистых, где обнаруживают цитоплазматические включения и элементарные тельца ;
- выделение возбудителя в культуре клеток;
- определение антигенов и нуклеиновых кислот Chlamydia trachomatis ;
- определение антител к Chlamydia trachomatis в сыворотке и других биологических жидкостях.
Микроскопия соскобов со слизистых, окрашенных по Гимзе, достаточно чувствительна только при конъюнктивите; в неопытных руках этот метод часто дает ложноположительные результаты. Сейчас даже в диагностике конъюнктивита вместо него применяют иммунофлюоресцентное окрашивание мазков с конъюнктивы, позволяющее выявить элементарные тельца .
Выделение Chlamydia trachomatis в культуре клеток доступно только в крупных медицинских центрах. Чувствительность этого метода невысока (всего 60-80%) и непостоянна, он требует неукоснительного соблюдения всех правил транспортировки материала в лабораторию, дорог и технически сложен.
На смену ему пришло определение антигенов возбудителя иммунологическими методами и нуклеиновых кислот - с помощью олигонуклеотидных зондов. Так, довольно часто используется метод прямой иммунофлюоресценции. Мазок отделяемого из половых органов или глаз окрашивают меченными флюоресцеином моноклональными антителами к антигенам хламидий. Обнаружение светящихся элементарных телец подтверждает диагноз. В диагностике хламидийного уретрита , цервицита и конъюнктивита у больных из группы риска чувствительность метода составляет 70-85%; он достаточно специфичен. Однако результаты исследования в немалой степени зависят от навыков врача-лаборанта. Для массовых обследований метод слишком трудоемок, да и чувствительность его в этом случае ниже.
Еще один метод определения антигенов хламидий - ИФА . При обследовании лиц из группы риска чувствительность его составляет 60-80%, специфичность - 97-99%. При хламидийном цервиците чувствительность метода в целом выше, чем при уретрите у мужчин. Так же, как и метод прямой иммунофлюоресценции, ИФА менее чувствителен при обследовании лиц, не относящихся к группе риска. Однако возможность одновременной обработки большого количества проб делает его удобным для массовых исследований.
Разработаны и методы диагностики хламидиоза с помощью олигонуклеотидных зондов. Один из них, основанный на гибридизации ДНК и РНК, оказался почти таким же чувствительным и специфичным, как ИФА.
Появились методы, основанные на амплификации нуклеиновых кислот путем ПЦР и лигазной цепной реакции. Это - наиболее чувствительные из существующих методов диагностики хламидиоза и пока единственные, которым удалось превзойти культивирование. Высокая чувствительность и специфичность определения ДНК Chlamydia trachomatis в моче с помощью ПЦР и лигазной цепной реакции позволяет отказаться от стандартного исследования мазков из мочеиспускательного канала и шейки матки, что особенно удобно при массовых обследованиях.
Серологические методы в диагностике хламидиоза применяются не очень широко. При венерической лимфогранулеме используют реакцию связывания комплемента с термостабильным антигеном, специфичным для рода Chlamydia , но при инфекциях, вызванных остальными серотипами Chlamydia trachomatis , она нечувствительна.
Метод микроиммунофлюоресценции более чувствителен, но пока малодоступен. Он позволяет определять типоспецифические антитела разных классов (IgM, IgG, IgA, секреторные IgA) в сыворотке и в отделяемом со слизистых. Метод используется в диагностике пневмонии у грудных детей (диагноз подтверждает высокий титр IgM-антител или четырехкратное повышение титра антител при исследовании парных сывороток), хламидийного сальпингита , в частности осложненного перигепатитом , и венерической лимфогранулемы .
В табл. 181.2 перечислены методы лабораторной диагностики инфекций, вызванных Chlamydia trachomatis. За редкими исключениями, наиболее приемлемым оказывается выделение возбудителя в культуре клеток либо определение его антигенов или нуклеиновых кислот.
Выбор метода часто зависит от возможностей лаборатории и опыта персонала. Напомним, что в большинстве случаев и для большинства целей наиболее чувствительными и специфичными являются методы, основанные на амплификации нуклеиновых кислот.
При судебно-медицинской экспертизе, например при обследовании изнасилованных или детей, ставших жертвами половых преступлений, обязательно прибегают к выделению возбудителя в культуре клеток либо к ПЦР или лигазной цепной реакции.
Так как Chlamydia trachomatis является внутриклеточным паразитом, в исследуемой пробе обязательно должны быть эпителиальные клетки. Если в пробе один гной, любые методы дают положительные результаты значительно реже. При уретрите берут мазок из мочеиспускательного канала, вводя тонкий тампон на глубину как минимум 2 см. Если для выделения возбудителя в культуре клеток предпочтительнее использовать мазок из мочеиспускательного канала (а не мочу), то ПЦР и лигазная цепная реакция более чувствительны при исследовании первой порции (30 мл) мочи. При взятии мазка из шейки матки осушают наружный маточный зев, в канал шейки вводят тампон на пластиковом стержне, медленно поворачивают его несколько раз и извлекают. ПЦР и лигазная цепная реакция при исследовании первой порции мочи не менее чувствительны, чем при исследовании мазка из шейки матки. Соскоб с конъюнктивы должен содержать не столько отделяемое, сколько эпителиальные клетки.
Все пробы, предназначенные для выделения возбудителя в культуре клеток, немедленно помещают в консервационную среду и ставят в холодильник (если материал попадет в лабораторию через 12-18 ч) или в морозильную камеру на -70*С (для более длительного хранения).
Главным преимуществом методов, отличных от культивирования, являются менее жесткие требования к транспортировке проб (не требуются ни быстрая доставка, ни охлаждение).
