Туляремия: диагностика
Микроскопия мазков-отпечатков и мазков, приготовленных из клинического материала и окрашенных специальными методами, выявляет Francisella tularensis внутри и вне клеток, расположенных поодиночке или группами. При окраске по Граму эти мелкие бактерии почти не отличимы от фона.
С успехом применяют метод непрямой иммунофлюоресценции, однако возможны ложноположительные результаты из-за присутствия в материале Legionella spp.
Как правило, диагноз туляремии подтверждают серологическими методами. Для предположительного диагноза достаточно обнаружить в реакции агглютинации титр антител, равный или превышающий 1:160. Диагноз становится окончательным, если при повторном определении через 2-3 нед титр агглютинирующих антител увеличивается в 4 раза. В начале заболевания серологическое исследование нередко дает ложноотрицательные результаты (в первые 3 нед - почти у 30% больных). На поздних стадиях заболевания титр антител обычно превышает 1:1000, затем снижается и годами сохраняется на уровне от 1:20 до 1:80.
Во многих лабораториях клинической микробиологии сейчас используют реакцию микроагглютинации, которая в 100 раз чувствительнее стандартной реакции агглютинации.
Для выявления антигенов Francisella tularensis и антител к ним сейчас с успехом используют ИФА .
Обнадеживающие результаты дали испытания метода определения антигена Francisella tularensis в моче, но наборов для постановки этой пробы пока нет в продаже.
Кожные аллергические пробы с тулярином становятся положительными на первой неделе заболевания и остаются такими на многие годы. Тулярин (туляремийный антиген) в США в продаже отсутствует; его введение способно привести к повышению титра агглютинирующих антител.
Выделить Francisella tularensis при посеве трудно. В одном из исследований, охватывавшем более 1000 больных (у 84% из них диагноз был подтвержден серологически), это удалось только в 10% случаев. Для посева обычно используют кровяной агар с добавлением цистеина и глюкозы. Francisella tularensis можно выделить из соскобов с язвы, биоптатов лимфоузлов, промывных вод желудка, мокроты, крови. Колонии Francisella tularensis голубовато-серые, круглые, гладкие, слегка слизистые, на кровяном агаре обычно дают альфа-гемолиз. Для идентификации культуры применяют реакцию агглютинации на стекле и метод прямой иммунофлюоресценции.
С помощью ПЦР можно выявить ДНК Francisella tularensis в крови. Этот метод обладает не большей чувствительностью, чем посев, и пока используется только в исследовательских целях.
