Первичная обработка микробиологических проб
Первичная обработка микробиологических проб в условиях лаборатории судна.
Образцы снега доставлялись на борт судна НИС "Академик Федоров" в течение не более, чем пяти часов после отбора. Снег растапливали в течение ночи при +4*С (температура на палубе судна). Дальнейшая обработка проб велась в судовой лаборатории, где были установлены ультрафиолетовые лампы и оборудован стерильный микробиологический бокс. Концентрирование образцов талой воды производили в течение первых 24-х часов с момента отбора снега, чтобы избежать возможных количественных и качественных изменений в составе микроорганизмов. Растопленный снег содержал минимальное количество видимых частиц пыли, поэтому предварительно отфильтровывать образцы для отделения минеральных включений не требовалось. В качестве отрицательного контроля использовали деионизованную воду (в количестве 10 л). Образцы талой воды объемом около 10 л концентрировали до объема 10 мл путем прокачки перистальтическим насосом через систему тангенциальных фильтров Millipore Pellicon XL (Millipore, США) с диаметром пор 100 кДа. Полученный образец концентрированной талой воды дополнительно концентрировали до объема 2 мл с помощью Amplicon Ultra фильтров с диаметром пор 30 кДа (Millipore, США); половину объема полученного концентрированного препарата смешивали с глицерином до конечной концентрации 15% (о/о) и замораживали при -20*С, а другую половину использовали для выделения тотальной ДНК и РНК.
