Мутации замены нескольких нуклеотидов: введение
При мутациях гена, представляющих собой замену одного или нескольких нуклеотидов, длины амплифицированных фрагментов остаются постоянными, однако, некоторые физико-химические свойства мутантных молекул ДНК меняются. Так, например, при гибридизации однонитевых ДНК, комплементарных нормальной и мутантной нитям ДНК, возникают структурные нарушения в месте негомологичного спаривания. С учетом этих особенностей разработаны различные варианты поиска мутантных фрагментов ДНК и идентификации в них точечных мутаций. Ведущими из этих методов являются: метод анализа конформационного полиморфизма однонитевой ДНК - SSCP , денатурирующий градиентный гель-электрофорез - DGGE , метод химического расщепления некомплементарных сайтов ( CMC ), метод гетеродуплексного анализа ( НА ) и, наконец, собственно метод секвенирования . Основные характеристики этих методов приведены в табл. 4.3 .
