Конфигурации пэтч-кламп метода
Пэтч-кламп метод позволяет осуществлять также регистрацию ионных каналов и в других конфигурациях. Достигнув контакта в конфигурации cell attached , можно, отводя электрод, оттянуть участок мембраны для формирования inside out (внутренняя сторона наружу) конфигурации ( рис. 2.3 С). В последнем случае цитоплазматическая сторона мембраны будет обращена к перфузионному раствору. С другой стороны, с помощью небольшого дополнительного присасывания можно прорвать участок мембраны, расположенный внутри регистрирующего электрода, обеспечив контакт последнего с цитоплазмой клетки ( рис. 2.3 D). В этих условиях будут регистрироваться токи в конфигурации whole-cell (целая клетка) . Наконец, после получения конфигурации "целая клетка", можно оттянуть электрод от клетки, сформировав из мембраны сначала тонкую перемычку, а затем, после отделения этого участка, получить конфигурацию outside-out (наружная сторона наружу ; рис, 2.З Е). Каждая из этих конфигураций имеет свои преимущества, их использование зависит от типа изучаемого ионного канала и той информации, которую мы хотим получить в данном эксперименте. Например, для аппликации веществ на внешнюю сторону мембраны предпочтительной является конфигурация outside-out.
Пэтч-кламп конфигурация "целая клетка" предполагает обмен между цитоплазмой клетки и раствором, заполняющим регистрирующую пипетку. Этот обмен, называемый иногда "диализ", может быть использован для намеренной замены внутриклеточного состава ионов на те, которые находятся в пипетке. С другой стороны (особенно в тех случаях, когда клетка мала), необходимо учитывать, что важные цитоплазматические компоненты могут быть потеряны из-за их быстрого перехода во внутрипипеточный раствор. Такой потери можно избежать, используя так называемый перфорированный пэтч-кламп метод ). В этом случае для формирования начальной cell attached конфигурации используется пипетка, заполненная веществом, способным формировать мембранные поры (например антибиотик нистатин ). По прошествии некоторого времени в изолированном с помощью электрода участке мембраны образуются проницаемые для электролитов поры, позволяющие регистрировать ионные токи в конфигурации "целая клетка".
