C-myc: Ауторегуляция негативная
Известно, что активированный c-myc (например, при транслокациях в лимфомах Беркитта и мышиных плазмацитомах ) и ген V-myc подавляют экспрессию эндогенного c-myc ( Leder P. et al., 1983 , Dunnick W. et al., 1983 , Nishikura K. et al., 1983 , Cole M.D., 1986 ).
В run-on экспериментах с ядрами клеток крысы RAT1 , инфицированных ретровирусами, кодирующими интактный или перестроенный белок c-Myc , было показано, что экзогенный c-myc вызывает подавление экспрессии ( Penn L.J.Z. et al., 1990 ). Набор случайно выбранных клонов RAT1, инфицированных вирусом, кодирующим человеческий c-myc, анализировали по количеству белка Myc (с помощью метода ELIZA ) и по уровню c-myc мРНК (с помощью метода защиты от РНКазы).
Выяснилось, что существует пропорциональная зависимость между степенью подавления экспрессии c-myc и количеством экзогенного белка Myc в клетке ( Penn L.J.Z. et al., 1990 ). Из этих данных следует, что уровень белка, необходимый для осуществления 90% подавления экспрессии, должен быть около 5000 молекул на клетку. Концентрация эндогенного Myc белка в экспоненциально растущих клетках RAT1 приблизительно 600 - 700 молекул на клетку. После стимуляции сывороткой покоящихся клеток наблюдается усиленная экспрессия мРНК c-myc (с пиком около 1 часа после стимуляции). При этом уровень белка Myc остается высоким в течение 1 - 2 часов. Причем его количество соответствует 5000 молекул на клетку, т.е. попадает именно в тот диапазон, в котором белок может по механизму обратной связи негативно регулировать экспрессию собственной мРНК.
По-видимому, процесс негативной регуляции нуждается в дополнительных транс-действующих факторах, так как в гибридах клеток мыши NIH3T3 (в которых нет такой негативной ауторегуляции) с клетками крысы RAT1 происходит подавление экспрессии мышиного гена c-myc факторами из клеток RAT1 ( Penn L.J.Z. et al., 1990 ).
Таким образом, негативная ауторегуляция экспрессии c-myc происходит на уровне инициации транскрипции прямо пропорционально внутриклеточной концентрации белка Myc. ( Penn L.J.Z. et al., 1990 ). Существует система позитивной ауторегуляции c-myc .
Возможно, эти две системы работают при разных концентрациях белка Myc в клетке. Позитивная регуляция способствует повышению экспрессии гена при низких концентрациях белка, а негативная - уменьшению экспрессии при высоких концентрациях белка Myc.
Таким образом, механизм негативной ауторегуляции может играть важную роль в поддержании стационарного состояния в клетке.
