c-myc: негативный регулятор в первом интроне
Недавно описан еще один негативный регулятор, находящийся в первом интроне c-myc на расстоянии 119 н.п. от его начала и занимающий 20 н.п. ( Zajac-Kaye M. et al., 1988 ). (См. C-myc: Транскрипции негативная регуляция ).
С помощью футпринт - анализа с ДНКазой I показано, что белок ядерного лизата клеток HeLa взаимодействует с этим 20 - нуклеотидным районом и не взаимодействует с аналогичным районом мутантного аллеля гена c-myc из лимфомы Беркитта PA682 ( Zajac- Kaye M. et al., 1990 ). При торможении в геле с олигонуклеотидом, соответствующим этому району, получаются две близко расположенные полосы.
При анализе последовательности перестроенных генов c-myc из лимфомы Беркитта в 7 случаях из 9 обнаружены мутации в этом участке. Показано, что точечной мутации в месте узнавания (в лимфоме PA682) достаточно для того, чтобы регуляторный фактор перестал с ним связываться.
С помощью аффинной хроматографии на колонке с иммобилизованным олигонуклеотидом выделен белок, связывающийся с этим участком - фактор MIF ( Zajac-Kaye M. and Levens D., 1990 ). Это белок с молекулярной массой 138 кДа, что показано Southern - Western блоттингом. Дальнейшие опыты по связыванию меченного олигонуклеотида с MIF показали, что в фосфорилированной форме он связывается гораздо лучше, что может свидетельствовать о включении в регуляцию системы сериновых протеинкиназ ( Zajac-Kaye M. and Levens D., 1990 ). По последним данным тех же авторов (делеционный анализ) ниже участка связывания MIF на расстоянии 216 н.п. от него может существовать еще один регуляторный домен ( Zajac-Kaye M. et al., 1990 ).
