Эритропоэтин: экспрессии регуляция
Используя двунитевые олигонуклеотиды, идентичные консервативным участкам 5'-фланкирующей области гена эритропоэтина мыши, проведена работа по идентификации ядерных факторов, связывающихся с этими участками ( Beru N. et al., 1990 ). Было показано, что в ядерных экстрактах нормальных почек и почек животных, получавших хлорид кобальта, присутствуют два типа факторов, связывающихся с 5' - фланкирующей областью гена эритропоэтина .
Один из них имеет молекулярную массу 47 кД и присутствует примерно в одинаковом количестве в обоих типах экстрактов. Другой фактор (или факторы) имеют рибонуклеопротеидную природу.
Идентифицированы четыре вида РНК, участвующих во взаимодействии с геном эритропоэтина, причем два вида РНК представлены в экстрактах после введения хлорида кобальта значительно меньшим числом копий, чем в нормальных экстрактах. Эти данные указывают на наличие негативных регуляторных факторов (вероятно, рибонуклеопротеидов), участвующих в регуляции экспрессии гена эритропоэтина.
Предположение о негативной регуляции экспрессии гена эритропоэтина, получило подтверждение и в работе Semenza G. et al., 1990 , получивших серию трансгенных мышей, несущих кодирующую часть гена эритропоэтина человека и различные фрагменты 5'-фланкирующей области. Анализ экспрессии гена у различных трансгенов позволил идентифицировать 3 регуляторных элемента гена эритропоэтина человека:
1) позитивный регуляторный элемент, необходимый для индукции экспрессии гена эритропоэтина в печени (этот регуляторный элемент входит в состав фрагмента длиной 4 т.п.н., включающего 0,4 т.п.н. 5'-фланкирующей области гена, кодирующую часть гена и 0,7 т.п.н. 3'-фланкирующей области;
2) негативный регуляторный элемент, расположенный между -0,4 и -6 т.п.н. 5'-фланкирующей области гена;
3) регуляторный элемент, необходимый для индуцибельной экспрессии гена в почках, расположенный далее -6000п.н. 5'-фланкирующей области гена или далее 700 п.н. 3'-фланкирующей области.
В этой же работе было показано, что существуют 2 участка инициации транскрипции гена эритропоэтина , несущих множество сайтов инициации. При нормальных условиях инициации транскрипции происходит с ограниченного числа сайтов, расположенных на обоих участках. При индукции анемии или обработке хлоридом кобальта количество функционирующих сайтов инициации транскрипции на обоих участках возрастает.
