Генно-инженерная модификация T-лимфоцитов для генной терапии рака
[ Anderson W.F., 1992 , Culver K.V., R.M.Blaese R.M., 1994 , Mulligan ea 1993 , Friedmann ea 1989 ].
Вот пример прекрасной идеи, которую оказалось не так просто претворить в жизнь. Первые опыты на человеке по геной терапии рака начались в 1989 году именно с идеи модификации Т-лимфоцитов. Но не просто Т-лимфоцитов, а так называемых Т-лимфоцитов инфильтрующихся в опухоль ( tumor infiltrating T-lymphocytes , TIL ).
Задачами этого исследования было показать, что экзогенные гены могут безопасно преноситься людям, и что эти гены могут обнаруживаться в клетках, взятых от пациента и возвращенных ему обратно. TIL было решено использовать потому, что имелись свидетельства, что эти лимфоциты, выделяемые прямо из опухоли, имеют сродство именно к этой опухоли. Поэтому надеялись, что в них можно будет ввести какой- либо ген, синтезирующий пагубный для опухоли продукт. Тогда они, TIL, доставят этот продукт прямехонько в опухоль и убьют ее избирательно.
Вот как ставились первые опыты. TIL брали у пациентов и с помощью ретровирусного вектора вводили в них известный вам ген устойчивости к неомицину. Модифицированные TIL растили в культуре в присутствии фактора роста Т-лимфоцитов IL-2. Затем маркированные таким образом Т-лимфоциты вводили обратно пациентам и следили за их судьбой, периодически анализируя образцы крови и биопсии опухоли. Оказалось, что да, можно вводить гены в Т-лимфоциты и доставлять их пациенту, не нанося ему вреда. Правда, осталось неясным, насколько специфично эти лимфоциты возвращаются в опухоль. Но поскольку вреда не было, то было решено вводить в TIL ген, кодирующий фактор некроза опухолей (Tumor necrosis factor, TNF ). Этот фактор представляет собой лимфокин, который проявил сильный противораковый эффект в опытах на мышах. Но при переносе на человека, он оказался очень токсичным. Вот интересное сопоставление. Мышь переносила его в дозе 400 #грамм на килограмм веса, а у человека уже при 8 #грамм проявлялся токсический эффект. Расчет на TIL был прост: этот токсический для опухолей лимфокин будет доставляться в целенаправленно в опухоли, там удастся создавать его высокие концентрации и он будет убивать опухоль на месте, не проявляя токсического действия на организм в целом. Клинические испытания по такой схеме идут с 1991, также как и дискуссии на тему эффективности такого подхода. Результаты видимо ожидают нас в не столь отдаленном будущем. А будут ли они положительными, посмотрим. Пока же указывают на трудности, связанные с трансформацией Т-лимфоцитов ретровирусными векторами и низкой экспрессией цитокинов, которая возможно связана с существующкей в Т-клетках системой регуляции синтеза цитокинов. Говорят также, что побочных эффектов, по крайней мере, такая терапия не вызывает.
Разрабатывается также комбинация двух подходов, о которых рассказано выше. Опухолевые клетки, взятые от животного, трансформируют генами цитокинов, как уже рассказывалось. Клетки вводят животному подкожно. Через какое -то время от него берут Т-лимоциты и растят в культуре в условиях роста Т-лимфоцитов. Затем их вводят обратно вместе с IL-2. Таким образом надеются усилить иммунную реакцию против опухоли.
