Таргетинг: кластерно расположенных генов
Ген, осуществляющий положительную селекцию, иногда вставляют не в экзонную последовательность таргетируемого гена, а вне ее. Такую стратегию использовали B. Masters и соавт. ( Masters B.A., ea., 1994 ) для "нокаутирования" гена металлотионеина I и гена металлотионеина II рядом расположенных в геноме. В замещающем векторе в оба гена были внесены стоп-кодоны, а ген neo вставляли в межгенное пространство. В результате единичная гомологичная рекомбинация приводила к нарушению экспрессиии сразу 2 генов. T.Jacks и соавт. ( Jacks T., ea., 1992 ) вставляли селектируемый ген в интронную область гена Rb и одновременно вводили 2 терминирующих кодона в предшествующий экзон, что приводило к инактивации гена-мишени при гомологичной рекомбинации. Иногда, учитывая возможность частичной сопутствующей экспрессии гена-мишени с промотора маркерного гена, вставленного в экзон, стоп-кодоны формируют в кодирующей области вектора, расположенной за маркерным геном ( Masu Y., ea., 1993 ). Это должно гарантировать полное выключение экспрессии таргетированного гена.
Таргетированную инактивацию кластерно расположенных повторяющихся генов теоретически можно осуществлять с помощью поэтапного "нокаутирования" каждого из них в отдельности. Однако более приемлем вариант, описанный для множественных элементов в гене рецептора Т-клеток ( TCR ) ( Mombaerts P., ea., 1991 ). Используя для гомологичной рекомбинации вектор, в котором содержались гомологичные последовательности, расположенные по краям кластера генов, удалось осуществить крупную делецию (около 15 т. п. н.) двух с_областей и 10 из 12 J-сегментов гена TCR.
