Вирус лейкемии кошек: диагностика
Какое именно тестирование на антигены следует применять? Все ВЛК- тесты базируются на обнаружении вирусного ВЛК-антигена р27 . Чем больше споров идет по поводу того или иного вида тестирования, тем совершеннее становятся его методы. За последнее время было создано много высоконадежных способов тестирования ВЛК-антигена. Какой из них выбрать для данного пациента, зависит от возможностей ветеринара, его знаний патогенеза ВЛК и того, как он повлияет на результаты анализа ( табл. 1(vtr11 ), количества уже протестированных кошек и возможной интерпретации результатов. В идеальном варианте каждая кошка должна пройти тестирование на ВЛК.
Американская ассоциация практикующих ветеринаров-фелинологов разработала руководство, в котором учитываются все возможные ситуации и даются советы, как и когда надлежит проводить тестирование животных ( табл. 2(vtr11 ). Однако практикующим ветеринарам все же следует исходить из собственного опыта и изучения состояния каждого конкретного пациента.
Каких кошек следует тестировать и каким образом это делать? Тест на иммунофлюоресцентные антитела ( ИФА ) периферийной крови считается "золотым стандартом" при тестировании на ВЛК. Положительный результат подтверждает наличие ВЛК-инфекции в костном мозге и позволяет с большой долей вероятности предсказывать развитие постоянной инфекции.
Недостатки этого теста таковы:
1) он несколько менее чувствителен, чем иммуносорбентный тест связывания фермента ( ELISA ) периферической крови;
2) поскольку он может быть проведен только в хорошо оборудованной лаборатории, его результатов приходится ждать дольше;
3) естественно, что он стоит дороже остальных тестов на ВЛК.
По этим причинам автор рекомендует использовать для обычного обследования (или предвакцинного тестирования) всех кошек (как здоровых, так и больных) самый чувствительный тест - ELISA, а тест ИФА - лишь для подтверждения положительных результатов первого тестирования или для оценки статуса ВЛК на основе образцов костного мозга.
Наборы ELISA для периферической крови обходятся дешевле, если одновременно используются для проведения множества тестов. Однако эти тесты зачастую оказываются технически ошибочными, хотя и выполняются высокопрофессиональным персоналом. Мембрана для теста ELISA намного надежнее, если используется только однократно. Некоторые данные позволяют предположить, что использование для тестирования цельной крови (не сыворотки или плазмы) может несколько повысить чувствительность некоторых тестов ELISA. Однако обломки клеток в некоторых системах тестирования способны давать ложноположительные результаты, поэтому цельная кровь должна быть использована только на том оборудовании, которое предназначено именно для ее анализа. Некоторые из этих систем имеют встроенный положительно-отрицательный контроль, поэтому любая техническая проблема или неточность перекрестных реакций немедленно становится очевидной. Одна из систем представляет собой комбинированное тестирование на ВЛК - ВИК , так что взрослая кошка может быть проверена сразу на оба вируса. Сравнительное исследование показало, что не существует принципиальной разницы в специфичности и чувствительности между четырьмя системами тестирования на антиген вируса ВЛК, поскольку во всех случаях и специфичность и чувствительность примерно равны 98%.
Но даже при высоком качестве нынешних систем тестирования следует принимать во внимание сферу распространения заболевания в обследованной популяции кошек.
Если эта сфера составляет только 1% в обычно здоровой популяции деревенских кошек, при надежности тестирования в 98%, то вероятность положительных результатов будет примерно равна всего 33%. Таким образом, два из трех положительных результатов, полученных при тестировании 100 здоровых кошек, оказываются ложными. По всей видимости, здоровую кошку никогда нельзя будет признать больной на основании одного-единственного положительного результата при ELISA-тестировании. Однако при использовании того же самого теста среди больной популяции кошек со сферой распространения ВЛК в 30% вероятность положительного результата будет составлять 99,7%.
Если тест ELISA для периферической крови дает положительный результат, то для подтверждения наличия инфекции и определения ее стадии следует прибегнуть к тесту ИФА . Если это невозможно, то через 3-4 месяца следует повторить тест ELISA. В том случае, когда кошка находилась на ранней стадии ВЛК-инфекции, в течение этого срока может произойти самоизлечение от этой инфекции и уничтожение виремии, что приведет к отрицательному результату. Кошки, дающие постоянную положительную реакцию на антиген ВЛК по истечении 3-4 месяцев, как правило, сохраняют ее на всю оставшуюся жизнь. Небольшое количество кошек, дающих постоянную положительную реакцию на тест ELISA для периферической крови, демонстрируют отрицательные результаты при тесте ИФА для периферической крови. Эта группа "противоречивых" кошек может содержать изолированную инфекцию в некоторых органах или тканях. Вирусный антиген просачивается в кровь, однако инфицированные вирусом клетки остаются в костном мозге. Неизвестно, где именно находится изолированный вирус (это могут быть слюнные железы или ткани полости рта), поэтому автор лечил этих "противоречивых" кошек как инфицированных ВЛК, при этом считая их потенциально опасными источниками заражения для других сородичей.
Тестирование слюны методом ELISA является весьма привлекательным ввиду легкости получения образцов для анализа и скорости самого тестирования, которое может быть проведено еще во время осмотра животного. Подобные достоинства позволяют быстрее установить диагноз ВЛК-инфекции, сразу же обсудить эту проблему с владельцем животного и дать ему соответствующие рекомендации по уходу за своим питомцем.
Однако этот тест несколько менее чувствителен и специфичен, чем тест на исследование крови или плазмы. При тестировании на ВЛК-антиген также можно использовать слезную жидкость, однако инфицирование эпителиальной ткани происходит лишь на последней стадии развития ВЛК. Кроме того, этот тест менее чувствителен на выявление антигена, поэтому никак не может быть рекомендован для повседневного использования. Все положительные или отрицательные результаты тестирования слюнной или слезной жидкости должны быть подтверждены анализами ELISA или ИФА для периферической крови.
Полимеразная цепная реакция ( ПЦР ) - это методика, используемая для быстрого выявления вирусного антигена. В некоторых исследованиях проводился сравнительный анализ результатов ПЦР-тестирования с результатами сывороточного тестирования ELISA в популяциях больных и здоровых кошек.
Совпадение было практически полным. Таким образом, у ПЦР-теста нет никакого диагностического преимущества, однако он стоит вдвое дороже и не может проводиться амбулаторно.
Кроме того, ПЦР не может быть успешно проведена на 20% образцов, представленных для одного исследования. Ее можно с успехом использовать для тестирования кошек, которые обладают симптомами ВЛК-инфекции, однако дали отрицательные результаты при повторном тестировании ELISA и ИФА. Если ПЦР сумеет выявить латентный вирус, то данное животное можно считать инфицированным. Для тестирования по этому методу лучше использовать не периферическую кровь, а костный мозг.
