Инфекции, вызванные Bartonella, у домашних кошек: диагностика
Мазки крови. Диагностировать бартонеллез с помощью светового микроскопа весьма трудно. Мазки периферической крови, приготовленные из образцов крови кошек с бактериемией, а также красители типа красителя Романовского не выявляют бартонеллу. Зато ее микроорганизмы можно наблюдать в мазках крови с помощью акридин-оранжевого красителя и флюоресцентного микроскопа, однако этот метод недоступен в большинстве ветеринарных клиник и у него есть ряд недостатков. Внутрикожное тестирование, которое много лет использовалось для диагностирования оцарапанных кошками людей, оказывается неэффективным при тестировании самих кошек. Материал для данного тестирования людей готовился из жидкости, взятой у пациентов, а затем гомогенизированной, стерилизированной и разбавленной. Кошки относятся к существам с гиперчувствительной реакцией, поэтому общераспространенные макроскопические признаки заражения - например, эритемы и отвердения - зачастую являются мимолетными и не фиксируются. При обследовании 16 экспериментально инфицированных кошек лишь у двоих обнаружилась слабоположительная реакция.
Серологические исследования. Для анализа сыворотки подходят оба основных вида тестирования - иммунофлюоресцентный анализ ( ИФА ) и иммуносорбентный тест связывания фермента ( ELISA ). С точки зрения чувствительности и специфичности они аналогичны. Поскольку различие между видами бактерий определяется с помощью нескольких иммунореактивно- поверхностных антигенов, постольку многие исследователи описали перекрестные реакции различных видов бартонеллы. Хотя кинетику иммуноглобулина определить не удается, для определения инфицированности данной кошки бартонеллой оказывается полезным серологическое тестирование. Оценивалась полезность ИФА для определения бактериемичности кошек: их результаты показали, что положительные прогнозы сбываются на 46,4%, а отрицательные - на 89,7%. Изредка некоторые бактериемичные кошки не синтезируют определимых антител, однако отрицательный результат серологического тестирования на Bartonella henselae и Bartonella claringeae в самом общем виде может быть интерпретирован как отсутствие инфицирования. Интерпретировать положительные результаты заметно сложнее. Кошки могут оставаться серореактивными, но анализ культуры их крови будет отрицательным. Это может быть отнесено в счет неспособности нашего тестирования кровяных культур выделять эти привередливые микроорганизмы или в счет периодической изоляции бартонеллы в других тканях. В подобной ситуации с помощью серологического тестирования нельзя определить потенциальную заразность кошки, однако данные некоторых исследований показывают, что высокие титры зачастую сопровождаются бактериемией.
Бактериологическое культивирование. Бактериологическое культивирование крови остается самым надежным средством диагностики бартонелла-инфекции. Но поскольку во время хронической инфекции культуроположительные интервалы могут препятствовать попыткам обнаружить наличие данной бактерии, постольку взятые у кошек образцы необходимо культивировать для повторного анализа. В идеальном варианте 1,5 мл крови, стерильно полученной из места прокола яремной вены, следует поместить в разъединительную трубку, где подвергнуть обработке в течение 24 часов. Разъединительные трубки содержат полианетолсульфонат натрия (ПСН), сапонин и полипропиленгликоль, которые помогают отделить бактерию от эритроцита. Если разъединительная трубка недоступна, то кровь следует поместить в трубку, обработанную этилендиаминтетрауксусной кислотой. Замораживание обработанной таким способом крови позволит добиться регенерации бактерии за один сеанс. Данный образец наносится полосками на агаровые пластинки и помещается в инкубатор с температурой 35 *С и 5%-ной двуокисью углерода. Как правило, увидеть колонию бактерий можно уже через 10-14 дней, но чтобы считать данную культуру отрицательной, ее следует выдерживать 60 дней, поскольку некоторые цепочки требуют значительно более длительного инкубационного периода. Бактерии бартонеллы можно регенерировать и с помощью обычных бутылочек с образцами кровяной культуры, но поскольку данные микроорганизмы производят небольшое количество двуокиси углерода, определить их рост будет непросто. Кроме того, рекомендуется слепая субкультура и акридин- оранжевый краситель содержимого бутылочки. Первичная изоляция бартонеллы может быть достигнута и благодаря использованию жидкостной среды или совместной клеточно-эндотелиальной культуры.
Члены рода бартонелла являются грамотрицательными, каталазоотрицательными, оксидазоотрицательными и уреазоотрицательными микроорганизмами. Биохимическое тестирование изолятов бартонеллы для предварительного образования ферментов и углеводной утилизации, как правило, ничем не примечательно. Бартонеллу трудно идентифицировать на видовом уровне, если не используется ПЦР и ей подобные генетические методики, однако они главным образом применяются не в ветеринарных клиниках, а в исследовательских институтах.
Выявление микроорганизма или антигена. Микроорганизмы можно увидеть в образцах тканей с помощью серебряных красителей Стейнера или Вартин-Старри. Однако эти методики не являются специфичными для определения бартонеллы, поскольку позволяют обнаруживать любую аргирофиличную бактерию. Для иммуноцитохимической идентификации бартонеллы в различных образцах можно воспользоваться поликлональными и моноклональными антителами . Для обнаружения ДНК бартонеллы в образцах крови или тканей безо всякого культивирования применяются молекулярные технологии. Молекулярно-диагностические тесты повышенной чувствительности и специфичности могут оказаться полезными для диагностики состояния хронического носителя заболевания, однако они доступны далеко не каждому ветеринарному врачу. Для выявления инфицированных кошек можно использовать ELISA , хотя этот тест еще недостаточно совершенен.
