Методы диагностики, основанные на идентификации ДНК
Методы, основанные на идентификации ДНК, наиболее часто применяются в диагностике, в том числе метод Южной гибридизации (в пятне или щелевой), ПЦР , цепной реакции лигазы , гибридизации in situ , in situ ПЦР и последовательности ДНК.
При Южной гибридизации для анализа генетического материала в клинических образцах используются нуклеиновые кислотные зонды с помощью электрофорезного блоттингового метода . Зонды используются для диагностики онкологических, инфекционных и генетических заболеваний. Сложность применения Южного блоттингового анализа в диагностической патологии заключается в его низкой чувствительности для обнаружения изменений ДНК (1-5%), необходимости получения ДНК из свежих тканей и промежутке времени, требуемом для получения результата (несколько дней).
ПЦР является ферментным методом in vitro, позволяющим увеличить в несколько миллионов раз специфическую последовательность нуклеиновой кислоты. Полимеразная цепная реакция облегчает систему обнаружения генетических нарушений, основанных на нуклеиновой кислоте, а также заболеваний, вызываемых вирусами, бактериями и другими микробами и особенно подходят для проб, взятых клиническим путем, поскольку, в отличие от других биологических методов, для ее успешного прохождения не требуется ДНК с тяжелым молекулярным весом.
Метод цепной реакции лигазы исключительно подходит для обнаружения известных мутаций.
In situ гибридизация применяется для демонстрации последовательностей нуклеиновой кислоты внутри клеток; она используется для обнаружения клеток-мишеней в применении к иммуногистохимическому анализу . In situ гибридизация позволяет определить и обнаружить ДНК (или РНК) и, аналогично иммуногистохимическому анализу, определяет продукт реакции, который может быть визуализирован и соотнесен с соответствующей тканью или клеточной морфологией.
In situ ПЦР сочетает ПЦР с in situ гибридизацией и позволяет обнаружить специфические амплифицированные фрагменты ДНК внутри изолированных клеток и срезов ткани.
