Диагностика атопии у собак: реагенты
После того как IgE данного пациента в ходе анализа in vitro связался со специфическими аллергенами, можно использовать разнообразные реагенты для обнаружения связанного IgE. Первоначально при анализах in vitro использовались поликлональные анти-IgE антитела. В настоящее время не существует стандартных методов и исследований, в которых сравниваются различные реагенты. Вследствие этого не всегда можно ожидать соответствия результатов, полученных разными компаниями.
Реагенты следует оценивать по их перекрестной реактивности по отношению к другим классам иммуноглобулинов . Предыдущие исследования показали, что некоторые из поликлональных иммуносорбентных анализов с ферментной меткой ELISA обладают 100%-ной чувствительностью. Данный метод обладает неудовлетворительной точностью (увеличивалось число ложноположительных результатов). Это могло быть следствием неспецифического связывания и перекрестной реактивности с другими классами антител ( IgG ) или измерения IgE неспецифических связей с твердым субстратом. С целью проведения более точного анализа in vitro в настоящее время для этих анализов применяются моноклональные анти-IgE собаки. Каждое моноклональное анти-IgE антитело образуется из единственного В-клеточного предшественника и обладает идентичными переменными участками и ограниченным числом эпитопов , с которыми оно связывается. Моноклональные анализы обладают большей точностью, но также оказываются менее чувствительными (возрастают ложноотрицательные результаты).
Известно, что IgE иммунные комплексы в системе кровообращения могут заметно менять величину IgE, особенно для моноклональных анти-IgE антител. Экспериментальная оценка моноклонального и поликлонального анти-IgE человека показала, что 20% IgE обнаруживается при помощи моноклонального анти-IgE, а 90% - при помощи поликлонального анти-IgE. У людей некоторые расы имеют слабые отклонения в молекулах IgE , которые не позволяют моноклональному антителу вступать в связи. Это следует иметь в виду в ветеринарной медицине при исследовании многочисленных пород животных.
Смешивание моноклональных антител способствует улучшению точности теста без потери чувствительности, но требуются дополнительные исследования в данном направлении. Ветеринарная аллергическая справочная лаборатория предлагает смешанный моноклональный aнти-IgE-peareнт с методом анализа в жидкой фазе. Другие компании используют поликлональные анти-IgE реагенты, за исключением Heska. Heska применяет Fc-эпсилон рецепторную альфа-цепь с высокой степенью связей (FceRla) и ELISA - иммуносорбентный анализ с ферментной меткой. Альфа-цепь является одной из трех протеиновых субъединиц, образующих IgE рецептор тучных клеток и базофилов . Другие антитела - IgA , IgM , IgG - не связываются с этим рецептором. Данный тест позволяет обнаружить только IgE, способный связываться с тучными клетками и базофилами, что характерно для этиологии атопии. Кроме того, если подкласс IgG, например IgGd , может связываться с этим рецептором, его можно будет обнаружить по этому тесту, в отличие от aнти-IgE-peaгентов. В исследовании 300 собак с атопией и 66 здоровых собак, в котором проводилось сравнение интрадермальных анализов с FceRla-системой, средняя точность достигала 90%. При использовании интрадермального теста в качестве "золотого стандарта" в данном исследовании отмечалась чувствительность 86% и точность 92%.
