Диагностика атопии у собак: тесты
В настоящее время являются доступными исследования in vitro, которые позволяют обнаружить IgE для специфического аллергена, и производятся они различными лабораториями и компаниями ( табл. 1(vtt10) ). Поскольку все лаборатории используют различную технику взятия проб и учет записей, полученные результаты могут отличаться друг от друга. Из-за этого трудно проводить сравнение различных анализов.
Радиоаллергосорбентный тест (RAST) был одним из первых доступных готовых тестов. Многие компании используют иммуноферментный твердофазный анализ ( ELISA ). Методы RAST и ELISA состоят в инкубировании аллергена, связанного с твердым субстратом, в сыворотке крови пациента. Лаборатории используют различные типы твердых субстратов. Доказано, что это влияет на неспецифическое связывание IgE. IgE для специфического аллергена пациента связывается с данным аллергеном. Именно во время инкубационного периода может произойти неспецифическое связывание. Анти-IgE собак, маркированный радиоизотопом при RAST или ферментным субстратом при ELISA, инкубируется с комплексом аллерген-антитело. После окончательного промывания производится замер оставшихся маркированных анти-IgE частиц комплекса антитело-аллерген. Берут данные как с отрицательным, так и положительным контрольным измерением сыворотки крови. В качестве отрицательного контроля берут данные, полученные при разведении сыворотки с водой или от общей сыворотки крови клинически здоровых собак. Положительные контрольные данные тестов не являются стандартными и могут в значительной степени варьировать. Положительные контрольные показатели обычно получают от собак с клиническими признаками атопии и положительным интрадермальным тестом. В некоторых лабораториях существует положительный контрольный тест для каждого испытуемого аллергена, а в других может быть лишь один из положительных контрольных аллергенов. На основании реактивности контрольных показателей установлена стандартная кривая и, в зависимости от реактивности сыворотки пациента, ей придается какой-либо балл. Определение положительного результата теста является до некоторой степени произвольным. Негативные контрольные данные сыворотки крови будут обладать некоторым количеством неспецифических связей, и пороговая точка для положительного результата часто определяется в выражении кратного числа к количеству неспецифических связей. По этим причинам результаты в разных лабораториях не совпадают.
Предшествующие исследования показали отсутствие разницы в степени или количестве положительных реакций здоровых собак по сравнению с больными атопией. Это ставит под сомнение точность вышеприведенных тестов. Многие из современных лабораторий пытались решить эту проблему, выполняя тесты с повышенной точностью. Ветеринарная аллергическая справочная лаборатория (VARL) использует современные технологии жидкофазного анализа. Поскольку аллергены представляют собой трехпространственные молекулы с многочисленными антигенными участками, один аллерген потенциально может взаимодействовать со многими различными антителами. Предположительно во время жидкой фазы воздействию подвергается большее число участков (по сравнению с теми, которые связываются в твердой фазе), что ведет к повышенной реактивности и чувствительности. Также предполагается, что технологии жидкофазного анализа ограничивают менее специфическое связывание, обусловленное электростатическими и гидростатическими силами, вызываемыми твердым субстратом, что ведет к получению высокого процента точности. Данный тест отличается от тестов при ELISA и RAST, поскольку в нем имеется два негативных контрольных теста для компенсации неспецифического связывания. Для первого берется общая сыворотка крови клинически здоровых собак, аналогичная той, что применялась другими лабораториями. Второй проводит оценку количества неспецифических связей для каждого испытуемого аллергена. Это делается следующим образом. После инкубационного периода жидкое содержимое переносится в две новые лунки, что препятствует неспецифическим связям, которые возникли во время инкубационного периода. В одной лунке комплекс антиген-антитело при помощи химической реакции связывается со стенкой испытуемой лунки. Во вторую лунку добавляется буферный ген, который не допускает связи комплекса аллерген-антитело с лункой. Затем указанные пробы промываются водой. В остальном данный тест напоминает ELISA, за исключением того, что степень реактивности буферной пробы уменьшена по сравнению с реактивностью химически связанной пробы. Это позволяет каждой реакции иметь свой собственный отрицательный контроль над неспецифической связью.
Несмотря на сложности интрадермальных проб, тем не менее они используются в качестве стандартных по сравнению с тестами in vitro. Одна из сложностей при интрадермальном тестировании заключается в слабой восприимчивости. Имеются популяции домашних животных, которые по своим клиническим критериям соответствуют диагнозам атопии и в то же время при интрадермальном тестировании дают отрицательные результаты. Преимуществом интрадермального тестирования является его точность, и по этой причине многие дерматологи продолжают использовать интрадермальное тестирование при выборе аллергенов для иммунотерапии. Однако при невозможности отменить препараты или при получении отрицательных результатов интрадермального теста проведение проб in vitro может оказаться более чувствительным при выборе аллергенов для иммунотерапии.
Тесты in vitro также дают лечащему врачу возможность провести аллергенные пробы и назначить иммунотерапию, не требуя в то же время больших расходов и квалификации, которые нужны для правильного выполнения интрадермального теста. Необходимы дополнительные исследования для оценки чувствительности и точности имеющихся тестов.
