Цитологическое исследование ветеринарной дерматологии
МЕТОДИКА. Предметные стекла следует заранее протереть 70%-ным спиртом для улучшения адгезии пробы. В зависимости от вида повреждения применяются различные методы цитологического взятия проб. Метод получения материала путем аспирации тонкой иглой чаще всего применяется при плотных поражениях. После аккуратного выбривания места взятия материала и дезинфекции поверхности, в центральную часть поражения вводят иглу N21 с присоединенным к ней шприцом на 10 мл и стараются набрать содержимое поражения в количестве 2 мл, потянув на себя поршень шприца. Не отпуская поршня шприца, иглу перемещают в разных направлениях внутри поражения (3-4 раза). Перед извлечением иглы из поражения поршень шприца отпускают для предотвращения поступления материала внутрь шприца. Затем иглу (содержащую пробу) отсоединяют от шприца, 10 мл воздуха набирают в шприц, после чего шприц снова соединяют с иглой. И, наконец, собранный материал помещают на предметное стекло путем быстрого надавливания на поршень шприца. Если полученного материал слишком много или он слишком жидкий, его можно распределить на несколько предметных стекол. Аспирация с помощью шприца также производится для взятия проб из кист, абсцессов, больших везикул и пустул.
При открытых, экссудативных поражениях и жирных себорейных поверхностях, а также из свежих поверхностей разреза после кожной биопсии или удаленных узелков рекомендуется брать мазки-отпечатки. При данном методе предметное стекло просто несколько раз прижимают (не оставляя полос) к месту поражения. Аналогичным образом можно собирать гной из пустул и под корками на коже после предварительного аккуратного из вскрытия иглой N25.
Цитологические пробы можно брать в виде мазка из фистул, из областей с глубокой пиодермией, из наружного слухового прохода или увлажненным тампоном с жирной поверхности кожи. Тампоном с пробой затем осторожно проводят по предметному стеклу. Всем цитологическим пробам нужно дать высохнуть на предметном стекле. Предметные стекла с пробами сальных желез или воском или пробами, собранными увлаженным тампоном, нужно перед окрашиванием слегка подогреть на огне спиртовой горелки. В цитологии чаще всего используются быстрые красители, в том числе модифицированные красители Райта (Diff-Quik, Hemacolor) и новый метиленовый синий. Другие красители, удобные или требующие специального лабораторного оборудования, такие, как для окрашивания по граму, PAS и красители May-Gr nwald-Giemsa, редко бывают необходимы.
После окрашивания предметные стекла быстро промывают водопроводной водой, дают высохнуть и исследуют под микроскопом с 10-, 40- и 100- кратным увеличением под инверсией. Чтобы полученный препарат сохранялся дольше, можно приклеить покровное стекло на предметное стекло специальным клеем (например, Eukitt или Accu-Mount 60, Baxter Healthcare Corp.). Препараты на ацетатной ленте также надо окрасить, промыть и прижать к предметному стеклу микроскопа клейкой стороной к стеклу.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ. Исследование проб, взятых из узелков, помогает выявить наличие воспаления (такие клетки, как нейтрофилы , макрофаги , лимфоциты и клетки плазмы крови ) или неоплазии . В воспалительном экссудате часто можно обнаружить присутствие бактерий и оценить их количество, форму и местоположение (внутриклеточные или внеклеточные). При цитологическом исследовании видимые бактерии обычно являются кокками (в основном Staphylococcus ). В редких случаях можно наблюдать палочки или смешанные инфекции (кокки и палочки). Палочки невозможно идентифицировать при помощи одного цитологического метода; поэтому для обнаружения внутриклеточных палочек или смешанных инфекций нужен анализ бактериальной культуры. Лишь внутриклеточные бактерии (обычно в дегенеративных утолщенных нейтрофилах) свидетельствуют о наличии пиодермии . Во многих случаях глубокой пиодермии наблюдается мало внутриклеточных бактерий, но обнаружено много нейтрофилов и макрофагов, а также некоторое число лимфоцитов и клеток плазмы. Присутствие внеклеточных бактерий говорит о заражении или об очень поверхностной пиодермии (например, "горячих пятнах"). Дрожжевая инфекция Malassezia редко присутствует в пробах, взятых со здоровой кожи, но она может находиться в пробах, взятых из здорового слухового прохода, и в обильном количестве содержится в пробах, взятых при жирной себорее или церуминальном отите . Эти дрожжевые грибы обладают гораздо большей величиной, чем большинство бактерий, по форме напоминают бутылку или земляной орех (проросшие дрожжи), и при окрашивании их цвет меняется от светло-голубого до темно-фиолетового при наблюдении проб, окрашенных модифицированным красителем Райта. Malassezia всегда бывает внеклеточной и часто прилипает к корнеоцитам . В пробах, взятых с кожи или из лимфатических узлов, иногда встречаются и другие микроорганизмы, например возбудители глубокой грибковой инфекции или Leishmania . При предполагаемом криптококкозе очень полезно смешать каплю черных китайских (или индийских) чернил с экссудатом для определения капсулы муцина, которая четко выделяется на темном фоне.
Стерильные пустулы с хорошо выраженными нейтрофилами , различным количеством эозинофилов и акантолитическими клетками с большой вероятностью указывают на пемфигоидный комплекс . Акантолитические клетки представляют собой маленькие темные округлые кератиноциты базального или шиповидного слоя, которые отделяются от окружающих клеток вследствие разрыва внутриклеточных соединений. Клетки-родоначальники больших размеров с прямыми краями и углами нельзя считать акантолитическими клетками, это обычные десквамативные корнеоциты . Настоящих акантолитических клеток особенно много у кошек при пузырчатке , и для них характерны массовые скопления. Некоторое количество акантолитических клеток иногда наблюдается в пустулах вследствие бактериальной инфекции. В этом случае они не так многочисленны и не скапливаются в больших количествах, и бактерии ясно видны внутри нейтрофилов. Бактерии наряду с акантолитическими клетками также наблюдаются в пробах, взятых из-под корок при пузырчатке, которая вероятнее всего является вторичной инфекцией. В таких осложненных случаях желательно выполнить несколько биопсий кожи и направить их дерматопатологу для окончательного диагноза.
Эозинофилы , основной тип клеток, выявляются в поражениях при эозинофильном гранулематозном комплексе у кошек, при эктопаразитозах ( чесотка , блохи , назальная пиодермия вследствие укусов членистоногих), у собак иногда из-за корма или контактной аллергии и в редких случаях при стерильных эозинофильных пустулезных высыпаниях. Зрелые поверхностные корнеоциты встречаются в пробах, взятых с поверхности кожи, или при аспирационной биопсии из фолликулярных кист. Эти корнеоциты представляют собой большие плоские светло-голубые безъядерные клетки с острыми краями, которые кажутся темно-синими, если располагаются в форме сигареты.
