Гаплоидизация в митозе
Если диплоид гетерозиготен по нескольким генам из разных групп сцепления, то при потере хромосомы с доминантными маркерами все рецессивные маркеры второго гомолога выходят в гемизиготу. Рецессивные маркеры одной группы сцепления, находящиеся в цис- положении (в одной хромосоме ), выходят в гемизиготу независимо от маркеров других групп, а находящиеся в транс-положении (в разных гомологах) совместно в гемизиготу не выходят. Частота совместного выхода в гемизиготу маркеров из разных групп сцепления, зависит от вероятности совместных потерь нескольких негомологичных хромосом. Это позволяет отнести маркер к определенной группе сцепления.
Если частота совместных потерь намного ниже, чем одиночных, то возможно картирование рецессивных мутаций только в цис-положении. Если рецессивные мутации находятся в транс-положении, то результат картирования будет неопределенным - не только сцепленные, но и несцепленные маркеры не будут выходить в гемизиготу совместно. Следовательно, нужно либо получать мутации у штамма, маркированного по всем группам сцепления, либо проводить дополнительные скрещивания для перевода мутации в цис-положение к тестерным маркерам.
Если частота потерь высока, то возможно картирование как в цис-, так и транс-положении. В первом случае картируемая мутация всегда будет выходить в гомозиготу с маркерами соответствующей хромосомы. Во втором случае - никогда не будет выходить в гомозиготу с той группой сцепления, к которой она относится, так как эти маркеры локализуются в другом гомологе.
Так мутацию rib5 картировали, индуцируя потери хромосом УФ-лучами у мутанта rad52. По данным табл.5 ген rib5 находится в хромосоме II , так как находясь в транс-положении по отношению к his7 , никогда не выходит совместно с ним в гемизиготу.
Картирование методом гаплоидизации будет успешно, если частота митотической рекомбинации намного ниже, чем частота потерь хромосом.
Для повышения частоты потерь хромосом используют беномил ( Wood, 1982 ), метилметансульфонат, ионизирующее излучение ( Shild, Mortimer, 1985 ), а также некоторые мутации по генам rad52 , cdc6 , cdc14 , chl1 , которые приводят преимущественно к одиночным потерям хромосом. Множественные потери можно индуцировать, действуя химическими и физическими агентами на фоне выше перечисленных мутаций ( Shild, Mortimer, 1985 ).
