Исследование функционально важных участков гена
Если анализ нуклеотидной последовательности не привел к выявлению консервативных последовательностей, применяют случайный мутагенез .
Так, с помощью делеционного анализа гена гистона H2A и гена гистона H2B были найдены области, существенные и несущественные для их функции ( Schuster et al., 1986 ). Делеционный анализ выявил UAS- и URS-последовательности в промоторе гена HIS3 ( Struhl, 1981 ) и в промоторе гена CYC1 ( Faye et al., 1981 ).
Если роль различных областей примерно известна, для изучения их структурных особенностей можно использовать сайт-направленный мутагенез . С помощью делеций и точковых мутаций были исследованы консервативные короткие повторы в аминотерминальной части гистона H2B ( Wallis et al., 1983 ), взаимодействие консервативного пептида гистона H4 с продуктом гена SIR3 , а также карбокситерминальный домен РНК-полимеразы II . Показано также, что замены в консервативных областях промоторов влияют на их функцию. Так, например, замена G -> A в сайте промотора CYC1 , взаимодействующем с белком HAP2p , приводит к десятикратному увеличению эффективности взаимодействия ( Bender, Pringle, 1989 ).
