Химерные гены
Большую роль в исследовании функции клонированных генов сыграли химерные гены. Например, с их помощью удалось выявить ДНК- связывающий и инактивирующий домены в белках GAL4p и GCN4p и показать, что эти домены функционируют независимо друг от друга. Для этого сконструировали гибридные гены, продукты которых содержали комбинации доменов, принадлежащих разным активаторам: например, объединяли ДНК-связывающий домен белка lexA E.coli и активаторный домен pGAL4, и исследовали их экспрессию.
Химерные гены использовали также для поиска последовательностей, необходимых для внутриклеточной транспортировки белка и его секреции, например, у пермеазы аргинина , кодируемой геном CAN1 . Cистема селекции клеток с геном дикого типа сложна и требует создания специальных штаммов. Поэтому предпочли получить химерный ген, содержащий промотор гена ADC1 , фрагменты кодирующей области гена CAN1 и кодирующую область гена SUC2 . Ген SUC2, кодирующий инвертазу , служил сигнальным маркером - при секреции инвертазы штаммы способны расти на сахарозе. Оказалось, что в гене CAN1 закодирована последовательность, необходимая для секреции продукта.
При исследовании функции промоторов их подстраивают к сигнальным генам. В этом случае можно наблюдать активацию транскрипции даже при наличии авторегуляции, поскольку продукт данного гена при стимуляции промотора не образуется. Сравнение промоторов одинаково регулируемых генов позволяет вывести обобщенную регуляторную последовательность.
С помощью химерных генов осуществляют также выделение и очистку генных продуктов. Химерные белки распознают с помощью антител к сигнальному маркеру. Белок alfa2 был выделен в виде химерного белка alfa2lacz.
ХИМЕРНЫЕ ГЕНЫ, СЛИТНЫЕ БЕЛКИ И ОНКОГЕНЕЗ
