Специализированные векторы
На основе плазмид векторы YEp , YCp , YRp и YTp конструируют специализированные векторы. Так, например, векторы YAC позволяют клонировать крупные (свыше 500 т.п.н.) фрагменты генома ( Burke et al., 1987 ). Они были использованы для создания банков генов высших эукариот: человека, дрозофилы и др. ( Albertsen et al., 1990 ; Brownstein et al., 1989 ; McCormick et al., 1989 ). Применение этих векторов существенно упрощает физическое картирование и секвенирование генома, позволяет клонировать крупные элементы хромосом (например, центромеры - Hahnenberger et al., 1989 ), локализовать проклонированные гены в определенных участках хромосом ( McCormick et al., 1989 ).
Созданы векторы, которые позволяют получать химерные гены . В них имеется сильный промотор и структурная часть сигнального гена, активность которого легко зарегистрировать. Между промотором и сигнальным геном имеется сайт клонирования, куда можно встроить любой ген в той же фазе считывания, что и сигнальный. Используют промотор PGK , промотор ADC1 , регулируемый галактозой промотор кластера GAL1-GAL10 , cигнальные гены: lacz ( Guarente, Ptashne, 1981 ), URA3 ( Alani, Kleckner, 1987 ), CUP1 ( Masson et al., 1987 ), ген бета-глюкуронидазы ( Schmitz et al., 1990 ), и ген галактокиназы ( Jacobs et al., 1988 ). Химерные гены необходимы для анализа функции промоторов, отбора мутантов по регуляции, тестирования функции регуляторных генов, гетерологичной экспрессии, изучения внутриклеточного транспорта, выделения продукта клонированного гена в составе химерного белка с помощью антител к продукту сигнального гена.
