Транспозоновый мутагенез
Eще один способ мутагенеза - отбор инсерций транспозонов в генах на плазмидах, культивтруемых в Е.coli. Существуют специальные системы транспозонного мутагенеза с использованием мини-транспозонов. Мини-транспозоны содержат ген-маркер и длинные концевые повторы, необходимые для транспозиции. Их транспозиция может происходить только в клетках, содержащих гены, кодирующие ферменты транспозиции, поэтому транспозицией можно управлять по желанию экспериментатора. Мини-транспозоны встроены в бактериальные ( Seifert et al., 1986 ) или фаговые векторы ( Huisman et al., 1987 ).
Сконструирован мини-транспозон Tn10 с бактериальным и дрожжевым селективными маркерами и геном lacz, инсерции в который дрожжевых последовательностей с сохранением фазы считывания приводят к получению химерных генов ( Huisman et al., 1987 ). Созданы векторы с элементом Ту1 дрожжей ( Garfinkel et al., 1988 ; Jacobs et al., 1988 ). Наиболее удобный вектор содержит элемент Ту1 под контролем промотора GAL1 и векторный маркер HIS3 . Индукция транскрипции Ty1 стимулирует перемещение. После нескольких пассажей на среде с галактозой отбирают клоны, утратившие плазмиду с Ту1, но содержащие маркер транспозона в хромосомах ( Garfinkel et al., 1988 ). Транспозоновый мутагенез удобен тем, что все отобранные клоны являются инсерционными мутантами, и не нужна их селекция.
