Клонирование генов с известными продуктами
Гены, продукты которых очищены, клонируют в векторах экспрессии на основе фага лямбда ( лямбдаgt11 ). Связано это не только с необходимостью экспрессии, но и с тем, что в отсутствие селекции удобно использовать векторы с крупными встройками, чтобы анализировать меньшее количество клонов трансформантов. Таким же способом выявляют гомологи генов высших эукариот. Ген или его продукт идентифицируют по гибридизации колоний трансформантов с пробой ДНК или антителами к продукту гена. Примером служит клонирование генов рРНК и генов тРНК по гидридизации с соответствующей РНК ( Beckman et al., 1977 ), генов гистонов , генов рибосомных белков , гена глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназы по гибридизации с кДНК, полученной на основе специфической очищенной мРНК ( Hereford et al., 1979 ; Woolford et al., 1979 ; Holland, Holland, 1979 ). По гибридизации с проклонированными генами дрозофилы у дрожжей были выявлены ген hsp70 ( Ingolia et al., 1982 ) и ген РНК-полимеразы В ( Ingles et al., 1984 ). Этот же ген был проклонирован по гибридизации с антителами, специфичными для РНК-полимеразы В высших эукариот. В том случае, когда очищен белковый продукт, к нему можно получить моноклональные антитела для идентификации рекомбинантного клона. Таким образом был клонирован ген ABF1 для белка ABF1p , связывающегося с репликатором дрожжей ( Rhode et al., 1989 ). Ген OBF1 был выявлен по гибридизации колонии, синтезирующей продукт этого гена, со специфическим олигонуклеотидом, содержащим последовательность, с которой связывается в дрожжевом репликаторе белок OBF1p ( Biswas et al., 1990 ).
