Методы отбора анеуплоидов
Спонтанные анэуплоиды возникают за счет нерасхождения в митозе и мейозе, и обычно редки. Частоту их появления повышают мутации, нарушающие репликацию, рекомбинацию и сегрегацию хромосом .
При отборе анэуплоидов в митозе из-за их низкой частоты возникновения необходима селекция. До недавнего времени селектировать удавалось только моносомики - по выходу в гемизиготу рецессивных маркеров. Для того, чтобы отличить моносомию от продуктов митотической гомозиготизации, маркируют оба плеча хромосомы. Моносомики по хромосоме I отбирают по выходу в гемизиготу мутации ade1 , что приводит к красной окраске колоний. У моносомиков, в отличие от гомозигот по мутации в гене ade1 (локализованном в правом плече хромосомы I) одновременно будет выходить в гемизиготу и мутация по гену cys1 (локализованном в левом плече этой же хромосомы) ( Petes, Smolik-Utlaut, 1979 ). Отбор моносомиков по хромосоме V проводят по появлению мутации can1 . Гомозиготы по этой мутации, возникающие вследствие митотической гомозиготизации, можно отличить от моносомиков по гетерозиготности по гену hom3 ( Hartwell, Smith, 1985 ).
Существует только две системы селекции дисомиков - по хромосоме III ( Инге-Вечтомов, Карпова, 1984 ) и по хромосоме VIII ( Whittaker et al., 1988 ). Обе основаны на селективном преимуществе дисомика, возникающем за счет увеличения дозы гена SLT3 или CUP1 .
Эти системы селекции пригодны и для отбора дисомиков в случайной выборке аскоспор. Другой способ получения дисомиков в мейозе - это отбор мейотических сегрегантов у полиплоидов : триплоидов и тетраплоидов ( Hilger, Mortimer, 1980 ; Riley, Manney, 1978 ). Используют методы селекции. Так, у триплоида, гетероаллельного по гену arg4 , удалось отобрать дисомики по хромосоме XV , которые, в отличие от гаплоидных сегрегантов, благодаря межаллельной комплементации могли расти на среде без аргинина ( Hilger, Mortimer, 1980 ).
Потери и нерасхождление хромосом можно индуцировать различными агентами: этилметансульфонатом ( Campbell, 1980 ), беномилом ( Wood, 1982 ), метилметансульфонатом( Sora et al., 1982 ), циклофосфамидом ( Sora et al., 1983 ), бромистым этидием ( Sora, Carbone, 1987 ), гигромицином В.
