Трисомный анализ
Принадлежность генов, не сцепленных с центромерами , к той или иной группе сцепления, можно определить, исследуя расщепления диплоидов- трисомиков по известным хромосомам. При скрещивании гаплоида с картируемой мутацией с дисомиком-тестером полявление тетрад типа 3:1 и 4:0 свидетельствуют о том, что картируемый ген находится в той хромосоме , которая представлена двумя копиями у тестера.
Из-за нестабильности дисомики-тестеры получают непосредственно перед опытом как мейотические сегреганты специально сконструированного триплоида. Эти сегреганты оказываются дисомиками сразу по нескольким хромосомам. Поэтому, для того, чтобы связать аномальное расщепление по картируемому гену с конкретной хромосомой, необходимо использовать несколько дисомиков.
При картировании гена arg1 селектировали сегреганты триплоида, гетероаллельные по arg1 (заведомые дисомики по хромосоме, в которой локализован этот ген). Как показало скрещивание с тестерными маркированными по всем хромосомам гаплоидами, эти сегреганты были дисомиками по нескольким хромосомам одновременно. Определить, в какой конкретно хромосоме находится ген arg1, удалось, сопоставив данные по нескольким гетероаллельным по arg1 сегрегантам.
Сконструирован специальный "супертриплоид", каждая хромосома которого маркирована (2 из каждой тройки гомологичных хромосомы несут аллель дикого типа, а третья гомологичная хромосома - мутантную аллель). 95% аскоспор триплоида содержат от 5 до 12 дополнительных хромосом. При картировании смесь спорулирующей культуры триплоида, обработанной пищеварительным соком улитки, и клеток гаплоида с исследуемой мутацией высевают на среду для отбора гибридов, и отобранные гибриды сразу подвергают тетрадному анализу. Исследование каждого гибрида позволяет исключить из списка "подозреваемых" хромосом в среднем 4,2 хромосомы. Таким образом, для картирования необходимо проанализировать не более 5 гибридов (по 15 аскоспор в каждом случае) ( Wickner, 1979 ).
