Исследование оперона микроцина C: ПЦР
Для клонирования фрагментов mcc оперона в вектор для поиска промоторов, получения мутантных вариантов плазмид и получения матриц для in vitro транскрипции необходимые фрагменты нарабатывали при помощи ПЦР с использованием плазмидных матриц. При необходимости использовали олигонуклеотиды с удлиненным и не спаренным с матрицей 5'-концом, содержащим сайт рестрикции. Условия реакции варьировали в зависимости от расчетной температуры отжига праймеров и длины матрицы. В качестве ДНК полимеразы использовали высокоточную Vent-полимеразу (New England Biolabs).
Стандартная смесь содержала 0.2 мМ каждого из дезоксинуклотидтрифосфата, 1 мкМ прямого и обратного прймеров, 1.5 мМ MgCl2 и 0.02 ед./мкл Vent полимеразы. Время элонгации подбирали исходя из рекомендованной производителем 1 мин на удлинение 1000 п.о.
