Особенности регуляции экспрессии mccF
Мы исследовали внутриклеточное содержание транскриптов кластера генов mcc на разных стадиях роста ( Рис. 20 ). Как видно, равновесная концентрация транскрипта mccF практически не изменяется во время эксперимента, т.е. наблюдается такая же динамика, как и для транскрипта конститутивного плазмидного гена b la.
В то же время короткий и полноразмерный транскрипты оперона mccABCDE начинают детектироваться лишь с середины экспоненциальной фазы, незадолго до появления McC в среде. Приведенные данные демонстрируют, что mccF действительно начинает транскрибироваться раньше остальных генов кластера, и его транскрипция практически не зависит от фазы роста культуры.
Ранее было показано, что экспрессия mccABCDE зависит от активности cAMP-CAP и, следовательно, подавляется при добавлении глюкозы [ Moreno, 2002 ; Fomenko, 2001 ]. Данных о влиянии добавления глюкозы на экспрессию mccF не имелось. Как оказалось, зависимость экспрессии mccF от глюкозы противоположна зависимости экспрессии mccABCDE. При выращивании клеток с добавлением глюкозы количество транскрипта mccF и соответствующего белка значительно возрастает по сравнению с их количествами в культурах клеток, растущих без добавления глюкозы, тогда как полноразмерный транскрипт и белок MccB практически не детектируются ( Рис. 21 ). Нам не удалось обнаружить перед промотором PmccF каких-либо известных регуляторных последовательностей ДНК, "отвечающих" на повышение концентрации глюкозы (таких, например, как сайт связывания фактора CAP ). Возможно, увеличение экспрессии mccF при добавлении глюкозы связано не с прямой активацией промотора PmccF, а с подавлением транскрипции основного оперона mccABCDE.
