Аутоиммунные заболевания: диагностика, антинуклеарные антитела
LE-клетки . LE-клетки (Lupus Erythematosus cells - клетки красной волчанки ) - это нейтрофилы или моноциты с крупными гомогенными базофильными включениями. Они представляют собой фагоцитированные ядра разрушенных клеток, покрытые антинуклеарными антителами . LE-клетки выявляются у больных СКВ в плевральном, перикардиальном, перитонеальном выпоте, синовиальной жидкости и СМЖ. Эти клетки получают in vitro, добавив к сыворотке больного лейкоциты здорового и ядра разрушенных клеток. На определении LE-клеток основан первый лабораторный метод диагностики СКВ, разработанный в 1948 г.
Диагностическая значимость. Выявление LE-клеток - трудоемкий и недостаточно чувствительный метод лабораторной диагностики СКВ, поэтому сейчас для диагностики этого и других аутоиммунных заболеваний используются более простые, дешевые и воспроизводимые методы, основанные на определении антинуклеарных антител.
Антинуклеарные антитела и определение антинуклеарных антител методом иммунофлюоресценции.
Определение. Антинуклеарные антитела - это антитела, связывающиеся с теми или иными структурами клеточного ядра. Чаще всего для определения антинуклеарных антител используется непрямая иммунофлюоресценция.
Методы выявления. В качестве клеточного субстрата используются замороженные срезы, например пищевода обезьяны, печени крысы, или препараты, приготовленные из суспензии клеток с крупными ядрами, например из человеческих клеток линии НЕр-2 . Определение антинуклеарных антител проводят следующим образом:
- клеточный субстрат инкубируют с исследуемой сывороткой;
- отмывают от несвязавшихся сывороточных белков;
- инкубируют в присутствии меченных флюоресцеином антител к человеческим иммуноглобулинам, после чего вновь отмывают;
- исследуют с помощью флюоресцентного микроскопа.
Антинуклеарные антитела, содержащиеся в исследуемой сыворотке, связываются с клеточным субстратом, а затем - с мечеными антителами против иммуноглобулинов. Если сыворотка не содержит антинуклеарных антител, меченые антитела, добавленные к клеточному субстрату, при отмывке удаляются ( рис. 15.2 ). Для определения титра антинуклеарных антител исследование проводят с серийными разведениями исследуемой сыворотки. Каждая лаборатория сама устанавливает нормальные показатели титра антинуклеарных антител, поскольку они зависят от типа клеточного субстрата и способа его фиксации. Чаще всего для выявления антинуклеарных антител используется культура человеческих клеток НЕр-2 (клетки рака гортани), содержащих много ядерных антигенов: Ro/SS-A, ядерный антиген пролиферирующих клеток и антигены центромеры.
Использование меченых антител к разным классам иммуноглобулинов показало, что большинство антинуклеарных антител относятся к IgG.
Диагностическая значимость. Основная цель исследования антинуклеарных антител - исключить СКВ , поскольку при этом заболевании антинуклеарные антитела появляются в сыворотке 95% больных в течение 3 мес после начала заболевания. Антинуклеарные антитела выявляются не только при СКВ, они могут обнаруживаться у пожилых, появляются при применении некоторых лекарственных средств, а также при некоторых артритах ( табл. 15.2 ).
Если титр антинуклеарных антител повышен, необходимо определить, к какому антигену они направлены ( табл. 15.3 ), так как при разных аутоиммунных заболеваниях выявляются антинуклеарные антитела разной специфичности. Титр антинуклеарных антител не позволяет судить об активности заболевания и эффективности лечения.
Тип окрашивания (характер распределения флюоресцентной метки в клетках) при разных заболеваниях неодинаков и определяет направление дальнейшего исследования антинуклеарных антител. Исследуемая сыворотка может содержать антинуклеарные антитела разной специфичности, однако тип окрашивания определяется теми антителами, которые присутствуют в наибольшем титре:
- Диффузное окрашивание (равномерное распределение метки) наименее специфично и встречается чаще всего при СКВ , лекарственном волчаночном синдроме и других аутоиммунных заболеваниях , а также у пожилых ( табл. 15.2 ). При диффузном окрашивании клеток реакцию повторяют с большим разведением исследуемой сыворотки. Если тип окрашивания остается прежним, наиболее вероятно, что антиген, против которого направлены антинуклеарные антитела, - дезоксирибонуклеопротеид .
- Периферическое окрашивание наблюдается, когда в исследуемой сыворотке преобладают антитела к ДНК. Этот тип окрашивания часто встречается при волчаночном нефрите .
- Пятнистое окрашивание обусловлено антителами к экстрагируемым ядерным антигенам и обычно наблюдается при системной склеродермии , смешанном заболевании соединительной ткани , синдроме Шегрена , лекарственном волчаночном синдроме .
- Нуклеолярное окрашивание (распределение метки в районе ядрышек) обусловлено антителами к рибонуклеопротеиду. Этот тип окрашивания характерен для системной склеродермии , изредка встречается и при других аутоиммунных заболеваниях.
