Сфингозин: синтез и локализация
Сфингоидные основания содержатся преимущественно в плазматических мембранах, где они генерируются из эндогенного церамида с помощью фермента церамидазы [ Slife, ea 1989 ].
Образование СФЗ в плазматических мембранах происходит в присутствии двухвалентных катионов, при нейтральном рН и является температурозависимым процессом [ Slife, ea 1989 ].
Образование сфингозина в лизосомах наблюдается при кислых рН, что указывает на наличие в клетке двух изоформ церамидазы (кислой и нейтральной), расщепляющей церамид до сфингозина.
Свободные СФЗ были найдены в печени крыс и мышей [ Merrill, ea 1989 , Русаков ea 1993 ], в клетках HL-60 [ Merrill, ea 1986 ], нейтрофилах [ Wilson, ea 1988 ] и других тканях.
Свободный СФЗ был также обнаружен в клеточных ядрах печени крыс и мышей [ Алесенко ea 1993 , Жижина ea 1994 , Alessenko, ea 1995 ].
Изолированные плазматические мембраны содержат 55 нг СФЗ на 1 мг белка, что составляет половину СФЗ, содержащегося в клетках печени [ Slife, ea 1989 ].
В ядрах клеток интактной печени количество СФЗ не превышает 0,45 нмоль на 1 мг белка [ Алесенко ea 1993 ]. Следует отметить, что в пересчете на СФМ количество СФЗ в ядре значительно выше, чем в целой клетке.
Образование СФЗ стимулируется при увеличении содержания в клетках церамида либо экзогенного происхождения, либо полученного в результате обработки мембран сфингомиелиназой , которая вызывает гидролиз эндогенного сфингомиелина [ Slife, ea 1989 ].
Увеличение содержания СФЗ в клетках в ответ на различные воздействия происходит в результате ферментативного расщепления церамида, а не за счет синтеза de novo [ Wilson, ea 1988 ]. Напротив, форболовый эфир (100 нМ РМА) уменьшает количество СФЗ почти в 1,5 раза и одновременно приводит к накоплению церамида.
Арахидоновая кислота и ионофор А23187 понижают содержание СФЗ в клетках [ Wilson, ea 1988 ].
Источником активного церамида является только сфингомиелин , другие сфинголипиды при ферментативном гидролизе генерируют церамиды, из которых не наблюдается появления СФЗ.
Количественный анализ свободных СФЗ был разработан Мерриллом с соавт., [ Merrill, ea 1989 ], затем этот метод усовершенствовался с целью минимизировать потери сфингоидных оснований при экстракциях и увеличения количества анализируемых образцов в клинико-лабораторных условиях [ Van ea 1989 , Castegnaro, ea 1996 ].
