Апоптоз: Белки, взаимодействующие с CD95 и TNF-R1
Несколько групп исследователей использовали дрожжевую двухгибридную систему для клонирования генов, кодирующих белки, взаимодействующие с внутриклеточной частью CD95 и TNF-R1 .
Были идентифицированы три различных гена - TRADD ( Hsu Y. et al., 1995 ), FADD/MORT1 ( Boldin M.P. et al., 1995 , Chinnaiyan A.M. et al., 1995 ) и RIP ( Stanger B.Z. et al., 1995 ). С-концевые участки этих белков содержат области, гомологичные "домену смерти" обоих рецепторов, причем мутации в этих областях предотвращают ассоциацию TRADD, FADD/MORT1 и RIP рецепторами. FADD/MORT1 (23 кДа) и TRADD (34 кДа) связываются только с TNF-R1 и CD95, соответственно, в то время как RIP (74 kDa) взаимодействует с CD95 и, в меньшей степени, с TNF-R1.
Вне последовательностей, подобных "домену смерти", эти три белка не имеют гомологичных участков. У двух из них, FADD/MORT1 и TRADD, отсутствует какой-либо определенный белковый мотив в N-концевой области, в то время как RIP содержит амино- концевой киназный домен , хотя его каталитическая активность пока не установлена. Гиперэкспрессия TRADD, FADD/MORT1 и RIP в трансфецированных клетках индуцирует апоптоз. Интересно, что рипер ( reaper ), пептид длиной в 65 аминокислот, участвующий в апоптотической гибели клеток у Drosophila ( White K. et al., 1994 ), также гомологичен "домену смерти" ( Golstein P. et al., 1995 ).
Поскольку ассоциация "доменов смерти" TNF-R1 и CD95 включает апоптотический каскад, можно думать, что и другие белки, содержащие подобный домен, могут участвовать в передаче сигнала или нарушать ее. В пользу такого предположения говорит тот факт, что гиперэкспрессия домена TRADD, взаимодействующего с TNF-R1, достаточна для индукции апоптоза. С другой стороны, гиперэкспрессия мутантов FADD, не способных связываться с CD95 или содержащих только N-концевую часть молекулы, также приводит к апоптозу. RIP с делетированным "доменом смерти" неактивен, однако и "домен смерти" сам по себе тоже не индуцирует апоптоз.
