Прямое секвенирование продуктов ПЦР
Прямое секвенирование продуктов ПЦР является эффективным и чувствительным методом выявления мутаций. С помощью прямого секвенирования одноцепочечных и двухцепочечных продуктов ПЦР стандартными методами можно обнаруживать до 99% мутаций при минимальном количестве ложноположительных и ложноотрицательных результатов. Метод позволяет не только точно локализовать мутацию в исследуемой последовательности нуклеотидов, но и определить ее тип и возможный механизм возникновения с учетом контекста окружающих ее нуклеотидов.
Современные методики позволяют определить последовательность не более чем из 300-400 нуклеотидов, поэтому прямое определение нуклеотидной последовательности информативно только в тех случаях, когда большинство мутаций находятся на одном небольшом участке. Этот метод позволяет выявить новые мутации и редко дает ложноотрицательные результаты. Порой вызывает сложности трактовка впервые обнаруженных миссенс-мутаций , которые могут быть как отражением бессимптомного полиморфизма белков, так и причиной болезни. Последнее особенно вероятно, если в семье наблюдается однозначное соответствие между наличием мутации и симптомами болезни или произошла замена консервативной аминокислоты , особенно в функционально значимой области белка.
