Гибридома
Гибридома (hybridoma): клетка , получающаяся в результате сплавления В-клетки , продуцирующей антитела , и опухолевой клетки. Такие клетки могут быть клонированы и поддерживаться длительное время в культуре, продуцируя моноклональные антитела . Клетки гибридомы можно также инъецировать мыши, в результате чего образуются асциты , содержащие моноклональные антитела .
Методика, позволяющая получать клеточные линии (гибридомы), секретирующие отдельные разновидности антител ( моноклональные антитела ) с желаемой антигенной специфичностью была описана в 1975 году. Это открытие определило бурный прогресс в использовании антител как для исследовательских, так и для практических целей, и в настоящее время "гибридомная технология" является одним из основных направлений в биотехнологии.
Обычно при иммунизации в ответ на антиген происходит синтез различных антител , т.е. антисыворотка гетерогенна. Метод гибридизации соматических клеток позволил получать клоны гибридных клеток, гибридом, продуцирующих идентичные антитела к одной антигенной детерминанте, т.е. моноклональные антитела.
Продуцентами антител являются лимфоциты , причем различные лимфоциты образуют разные антитела. Однако лимфоциты характеризуются ограниченным сроком жизни в культуре. С другой стороны, известны злокачественные опухоли, миеломы, вырабатывающие большие количества аномальных иммуноглобулинов. Клетки миеломы хорошо размножаются в культуре и представляют собой " бессмертные" линии . Задача заключалась в том, чтобы выделить клоны клеток, продуцирующих один тип антител и при этом способных неограниченно долго размножаться. Впервые гибридомы, образованные слиянием культивируемых клеток миеломы с клетками селезенки иммунизированной мыши, были получены Келером и Мильштейном [ Kohler, 1975 ].
Использование клеток миеломы, мутантных по гену ГФРТ , позволило для выделения клонов применить среду HAT . В настоящее время метод получения гибридом с различными модификациями используется для того, чтобы иметь моноклональные антитела к различным антигенам. Клоны, продуцирующие моноклональные антитела, могут быть размножены и заморожены. При введении их сингенным животным образуются асцитные опухоли, содержащие большие количества моноклональных антител. Такая возможность получения различных моноклопальных антител в настоящее время широко используется для решения многих задач практической медицины, в частности, в целях диагностики.
Гибридомы являются бессмертными клеточными клонами, продуцирующие антитела одной специфичности. Полученные при слиянии нормальных лимфоцитов , продуцирующих антитела, с подходящей опухолевой линией B-клеток, гибридомы отбирают в культуральной среде, неспособной поддерживать рост родительских клеток. Путем последовательных разведений и пересевов получают одиночные клоны, которые можно выращивать в роллерных культурах или в форме асцита в брюшной полости мышей. В последнем случае удается получать особенно высокие титры моноклональных антител. При этом, естественно, все молекулы иммуноглобулинов , продуцируемые определенной гибридомой, идентичны: они относятся к одному классу и одному аллотипу , имеют одинаковые вариабельные области , структуру, идиотип , афинность и специфичность к данному эпитопу .
На современном этапе созданы десятки тысяч высокоафинных антител, связывающихся с белками, углеводами, нуклеиновыми кислотами, а также низкомолекулярными антигенами. На их основе получены конъюгаты с различными функциональными соединениями, токсинами, ферментами, магнитными частицами, радиоактивными и рентгеноконтрастными атомами и т.п. Эти конъюгаты находят широчайшее применение в научных исследованиях, медицине, ветеринарии. Описаны примеры получения с помощью указанной технологии антител, обладающих каталитической активностью, так называемых абзимов (abzyme от англ. antibody и enzyme).
Клетки миеломы, применяемые для получения гибридом и осуществляющие эффективную секрецию рекомбинантных белков, хорошо изучены в отношении экспрессии в них соответствующих рекомбинантных генов, введенных с помощью трансфекции .
