Аптазимы
Метод SELEX позволяет получить аптамеры, которые обладают каталитической активностью, активируемой при связывании с молекулой-мишенью. Подобные аптамеры получили название аптазимов ( Famulok, 2005 ; Hesselberth et al., 2000 ). Схема получения аптазимов приведена на Рис. 7.3 Б. Библиотека, используемая при получении аптазимов, содержит в своем составе последовательность какого-либо рибозима (например, hammerhead-рибозима, способного специфически расщеплять собственную последовательность), расположенную рядом с участком случайной последовательности. В результате присоединения случайного района разные молекулы РНК различаются по своей каталитической активности. В ходе отбора производится селекция тех последовательностей, которые не обладают каталитической активностью в отсутствие молекулы-мишени, но осуществляют каталитическую реакцию в комплексе с мишенью.
В качестве эффекторной молекулы при отборе аптазимов обычно используют различные метаболиты или короткие пептиды ( Hesselberth et al., 2000 ; Robertson et al., 2004 ). Стоит отметить, что данный метод позволяет получать как РНК-, так и ДНК-аптазимы. Аптамеры данного типа также могут применяться для детекции молекул-мишеней ( Hesselberth et al., 2000 ). Например, если при активации рибозима, содержащего в своем составе флуоресцентную группу и гаситель флуоресценции, происходит отщепление гасителя флуоресценции, то связывание молекулы-мишени можно детектировать по увеличению сигнала флуоресценции ( Burgstaller et al., 2002 ). Кроме того, аптазимы можно использовать для создания искусственных систем регуляции генной экспрессии in vivo. Так, было показано, что если последовательность аптазима, регулируемого теофиллином, поместить в 5'-нетранслируемой области мРНК, то при экзогенном добавлении теофиллина к клеткам, экспрессирующим химерную мРНК, происходит активация аптазима и расщепление мРНК ( Davidson and Ellington, 2005 ; Thompson et al., 2002 ).
Аптамеры: перспективы
использования
