Цитохром b2 (Ь(+)-лактатдегидрогеназа)
Заканчивая рассмотрение дыхательной цепи дрожжевых митохондрий, необходимо остановиться на специфическом для дрожжей переносчике - b(+)-лактатдегидрогеназе или цитохроме b2 ( КФ.1.1.2.3 ). Цитохром 2 представляет собой бифункциональный тетрамер с двумя простетическими группами - FMN и гема , каждая из субъединиц имеет Mr=55000 Да [ Jacq ea 1974 ], а Mr тетрамера составляет ~ 230000 Да. Цитохром b2 относится к группе цитохромов b , специфическим субстратом является b(+)-лактат , а акцептором электронов служит цитохром с [ Hagihara ea 1975 ]. Ген цитохрома b2 из S. cerevisiae изолирован и секвенирован. Открытая считывающая рамка кодирует белок из 591 остатка аминокислот с Mr-65522. Цитохром b2 синтезируется в цитоплазме как предшественник с длинной препоследовательностью с N-конца в 80 остатков. Зрелый белок содержит 511 остатков аминокислот и имеет Mr=56569. Белок обладает основными свойствами и содержит гидрофобный сегмент, способный пересекать мембрану [ Guiard ea 1986 ]. Детально изучена структура цитохрома Ьb S. cerevisiae при разрешении 2,4-3,0 А [ Xia ea 1990 , Xia ea 1987 ]. Тетрамер имеет четырехкратную симметрию, каждая субъединица состоит из двух основных доменов - домена цитохрома b, в котором локализована цепь из первых 99 остатков аминокислот с N-конца ( гемсвязывающий фрагмент ), и домена, содержащего флавин, с цепью от 100-го до 486-го остатка. Полипептид заканчивается хвостом из 25 остатков, который контактирует с каждой из субъединиц тетрамера. Флавиновое кольцо и гем находятся на расстоянии 16 А от их центров. Домен, связывающий флавин , состоит из 8 параллельных структур с бета-складками и а-спиралями. Взаимодействие флавина с пептидной цепью установлено на уровне отдельных остатков аминокислот [ Xia ea 1987 ]. Аминокислотная последовательность гемсодержащего фрагмента цитохрома b2 оказалась гомологичной таковой гемсодержащего фрагмента цитохрома b5 микросом , а флавиновый домен b2 оказался гомологичным таковому двух энзимов, содержащих FMN- гликолактоксидазе и триметиламиндегидрогеназе [ Xia ea 1990 , Xia ea 1987 ].
Митохондрии: цитоплазматические
факторы, влияющие на импорт белков
