Молекулярная диагностика: общие сведения
Локализация и клонирование последовательностей кДНК генов открывают принципиально новые возможности диагностики наследственных заболеваний, основанные на исследовании мутантных аллелей у пациентов, членов их семей или у предполагаемых гетерозиготных носителей патологических мутаций. Это относится и к пренатальной диагностике, которая может быть проведена с использованием молекулярных методов анализа на самых ранних стадиях развития плода. Эти подходы приемлемы для диагностики до появления каких-либо клинических или биохимических симптомов болезни ( досимптоматическая диагностика ), что позволяет выработать и начать рациональную тактику лечения ( упреждающая терапия ), а также эффективно выявлять гетерозиготных носителей в семьях высокого риска , что является важным фактором профилактики наследственных болезней.
Преимуществами молекулярной диагностики являются ее универсальность, возможность использовать для анализа любые ДНК- содержащие клетки или ткани, причем анализ может быть произведен на любых стадиях онтогенеза, начиная со стадии зиготы.
Различают прямую и непрямую ДНК-диагностику моногенных наследственных болезней.
В генодиагностике используют следующие основные подходы:
- клонирование генов и фрагментов ДНК с помощью методов рекомбинации;
- определение последовательности фрагментов ДНК;
- гибридизацию нуклеиновых кислот;
- идентификацию рестрикционных сайтов;
- амплификацию ДНК с использованием ПЦР;
- транскрипцию ДНК с последующей трансляцией in vitro для анализа белкового продукта.
Обычно используется сочетание методов, причем иногда исходным материалом служит не ДНК, а мРНК.
