E1 бета-Ген BCKDH комплекса
Ген E1 бета субъединицы дегидрогеназы кетокислот с разветвленной цепью
В 1990 году была выделена кДНК E1 бета субъединицы дегидрогеназы кетокислот с разветвленной цепью BCKDH комплекса (branched chain a-keto acid dehydrogenase complex) быка ( Nobukuni Y.,1990a ). Выделенная кДНК содержала 5' нетранслируемую последовательность из 186 нуклеотидов, транслируемую последовательность из 1176 нуклеотидов и 3'нетранслируемую последовательность из 306 нуклеотидов с поли-А концом. Из нуклеотидной последовательности кДНК была выведена аминокислотная последовательность для 342 аминокислотных остатков.
В том же году были опубликованы две работы по клонированию и секвенированию кДНК Е1 бета субъединицы комплекса BCKDH человека ( Chuang J.L.,1990 ; Nobukuni Y.,1990b ). Транслируемая последовательность кДНК (1176 bp) кодирует лидерную последовательность предшественника зрелого пептида из 50 аминокислот, отщепляемых при транспортировке через мембрану митохондрий, и собственно аминокислотную последовательность из 342 аминокислотных остатков бета субъединицы. На Рис. 20 представлены нуклеотидная (мРНК) и аминокислотная последовательности бета субъединицы дегидрогеназы.
В 1991 году был клонирован ген Е1 бета субъединицы дегидрогеназы человека ( Mitsubuchi H.,1991a ). Ген протяженностью около 100 килобаз состоит из 10 экзонов. Размер экзонов колеблется от 69 до 298 пар нуклеотидов, величина интронов варьирует от 0,8 до 25 килобаз. В Таблице 26 приведены экзон-интронные сочленения гена Е1 бета субъединицы дегидрогеназы. Кодирующая часть гена составляет 1,4% нуклеотидной последовательности гена.
В 5'области данного гена выявлены последовательности CCAAT, представляющие канонические CAAT бокс ы и комплементарная последовательность ATTGG в позиции нуклеотидов -39 и -75. В гене отсутсутствуют канонические TATA боксы. Кэп сайт локализуется в положении - 47.
Присутствуют три мотива связывания транскрипционных факторов SP1 (CCGCCC), инвертированная форма (GGGCGG) в позициях от -98 до -93, от -56 до -51 и от -13 до -8. Два мотива энхансерных последовательностей (TGGAAA) расположены в положениях нуклеотидов от -532 до -527 и от -311 до -2306. Промоторная область гена содержит прямые (DR) и инвертированные (IR) повторы. На Рис. 20a представлена 5'фланкирующая область гена.
В 3'нетранслируемой области гена из 160 нуклеотидов расположен сигнал полиаденилирования AATAAT , лежащий ниже поли-A конца на 13 нуклеотидных оснований.
