Использование релаксина сыворотки крови для диагностики беременности у сук
Пока не существует недорогостоящих и удобных способов ранней диагностики беременности у сук после вязки или искусственного осеменения. Схема секреции половых гормонов , эстрогена , прогестерона и гипофизарного гонадотропина одинакова при истинной и ложной беременности. У сук не продуцируется плацентарный гонадотропин ( хорионный гонадотропин - хГТ ), наподобие того, что используется для диагностики беременности у людей. Следовательно, владельцы племенных сук должны выбирать дорогостоящие процедуры, такие как УЗИ, для определения беременности суки после планового осеменения либо в случае нежелательной вязки. С другой стороны, им приходится ждать, пока плоды не вырастут настолько, чтобы обнаружить их при пальпации матки. Благодаря этим методам можно диагностировать беременность на 4-5-й и 9-й неделе беременности соответственно.
Показано, что 6-kD полипептидный гормон релаксин является специфическим маркером беременности у сук. Благодаря радиоиммунному анализу (РИА) или иммуноферментному анализу (ИФА) релаксин можно обнаружить в крови после имплантации оплодотворенных яйцеклеток, что происходит на 19-21-й день после вязки. Это совпадает с предположениями, что релаксин секретируется плацентой. Он никогда не появляется в крови у сук с ложной беременностью, что позволяет точно дифференцировать истинную и ложную беременность.
Пока не существует коммерческих наборов для иммунного анализа релаксина у собак, однако примененные материалы и методы (РИА и ИФА) описаны в различных источниках ( Bullesbach and Schwab, 1991 ; Rodbard, 1974 ; Sherwood, 1994 ; Steinetz et al., 1996 ).
Для быстрого и удобного использования ИФА в целях определения релаксина нужны новые исследования, так что это вопрос ближайшего будущего. В наших исследованиях для установления самого раннего срока беременности, когда концентрация релаксина в крови становится определимой, были исследованы семь сук трех различных пород, у которых было точно зафиксировано время вязки. У сук брали серийные образцы крови (1-2 мл) через день, начиная с проэструса и в течение всей беременности до родов. После образования кровяного сгустка и центрифугирования сыворотку собирали и замораживали до проведения анализа. Показатели овуляции: пик концентрации лютеинизирующего гормона (ЛГ) оценивали специфическим ИФА (набором IGG Status-LG или количественным IGG LG EIA), а рост концентрации прогестерона - специфическим РИА (International Canine Genetics Biomedicals). Сук искусственно осеменяли в момент роста концентрации прогестерона. Данные по изменению концентрации релаксина фиксировали с момента пика ЛГ до родов. При обычных тестах на беременность образцы крови (1-2 мл) берут через 25 дней после зафиксированной копуляции или предполагаемой вязки. На момент вязки пик ЛГ и рост концентрации прогестерона оценивали при помощи РИА или ИФА, а определение релаксина проводили на 23-26-й день после пика ЛГ. Обычно для тестов на беременность мы брали сыворотку, но можно использовать и плазму крови.
РЕЗУЛЬТАТЫ. Сывороточную концентрацию релаксина, определяли при помощи РИА в последовательной серии образцов крови, которые брали у семи сук, начиная с проэструса и в течение всей беременности ( рис. 1(ct6) ). По данным был построен график по шкале десятичных логарифмов, который демонстрирует самое раннее определение релаксина за 42-38 дней до родов. При помощи РИА у всех сук появление релаксина было зафиксировано на 22-27-й день после выброса ЛГ , при помощи ИФА определение релаксина у трех сук было произведено на 1-2 дня раньше ( табл. 1(ct6) ).
Метод оказался чувствительным и специфичным с хорошим совпадением результатов при анализе более чем 300 образцов крови, взятых у собак различных пород без ложноположительных результатов даже при использовании больших объемов крови (300-400 мкл). Релаксин никогда не находили в крови кобелей или сук с ложной беременностью. Релаксин присутствовал в крови и молоке в период лактации в различные промежутки времени, но это физиологическое состояние в корне отличалось от ранней беременности. Неожиданное отсутствие релаксина в сыворотке также является показателем вероятности спонтанного выкидыша.
Тест на релаксин для ранней диагностики беременности являются недорогостоящим и удобным методом, который позволяет быстро определить результат желательной или нежелательной вязки, поэтому скоро он станет надежным диагностическим инструментом в руках ветеринарных врачей.
