Герпесвирус-1 кошек: диагностика инфекции
I. Клинические симптомы инфекции герпесвирусом-1 кошек (ГВК-1).
Первичная инфекция. Первичная инфекция в основном наблюдается у молодых кошек и новорожденных котят и характеризуется двусторонним конъюнктивитом и симптомами инфекции верхних дыхательных путей . По мере прогрессирования заболевания первоначальные серозные выделения становятся гнойными , а конъюнктива - сильно гиперемированной и отекшей . Несмотря на то, что во время первичной инфекции обычно не отмечают поражения роговицы , тщательное обследование после применения розового бенгальского красителя может выявить мелкие ветвистые нарушения эпителия ( микродендрит ). Все нарушения, обнаруженные во время первичной инфекции, являются результатом прямого вирусного цитолиза. Следствием атипично тяжелой инфекции может быть симблефарон .
Рецидивирующая инфекция. Клинические симптомы рецидива инфекции ГВК-1 могут быть совершенно разными. По контрасту с первичной инфекцией, заболевание дыхательных путей обычно отсутствует, а вовлечение глаз может быть одно- и двусторонним. Самым распространенным проявлением рецидива инфекции является хронический и/или рецидивирующий конъюнктивит. Наиболее яркими клиническими симптомами являются легкий блефароспазм и персистирующие выделения из субконъюнктивальных мешков . По неизвестным причинам хроническая инфекция ГВК-1 вызывает накопление темно-коричневого материала в углу глазной щели . ГВК-1 провоцирует две основные формы кератита : инфекция может затрагивать только эпителий или может вовлекать строму роговицы . Подобно заболеваниям конъюнктивы эпителиальные нарушения являются результатом прямого вирусного цитолиза. Хотя дендрит считают патогномоничным признаком инфекции ГВК-1, большинство случаев характеризуется случайной схемой изъязвления роговицы и поверхностной васкуляризации. Стромальный кератит обычно является следствием хронического или рецидивирующего эпителиального кератита. В противоположность эпителиальному кератиту воспаление стромы считается не прямым результатом вирусной инфекции, a CD4+ Т-лимфоцитарной подготовкой иммунной реакции на вирусные белки.
Интересно, что при последних исследованиях с применением полимеразной цепной реакции ( ПЦР ) для кератэктомических образцов была выявлена позитивность на ДНК ГВК-1 у кошек с секвестром роговицы и эозинофильным кератитом. Это показало, что большинство этих заболеваний вызваны или связаны с инфекцией ГВК-1. Данные результаты следует учитывать при назначении лечения.
II. Лабораторные методы исследования инфекции герпесвирусом-1 кошек (ГВК-1).
Выделение вируса. Несмотря на то, что изоляция вируса долго считалась золотым стандартом диагностики вирусных заболеваний, проблемы с транспортировкой лабильных образцов, отправляемых на посев, сделали этот подход непрактичным. Более того, высокая чувствительность ПЦР сделала изоляцию вируса ненужной для диагностики.
Иммунофлюоресценция. Более 30 лет иммунофлюоресцентные анализы конъюнктивальных соскобов были самым распространенным методом диагностики инфекции ГВК-1. Несмотря на дешевизну и простоту, иммунофлюоресценция слабочувствительный метод. Поэтому в диагностике клинических пациентов его и заменила ПЦР.
Серология. При диагностике вирусных инфекций часто сравнивают титры нейтрализованных антител в парных образцах сыворотки. Поскольку клинически инфекция ГВК-1 чаще проявляется как обострившаяся, чем первичная, то титры к ГВК-1 во время выздоровления могут расти непредсказуемо. Более того, большинство взрослых кошек вакцинированы против ГВК-1, поэтому по результатам серологических анализов невозможно дифференцировать антитела, выработанные при естественной инфекции, от антител после вакцинации. Следовательно, серология имеет малое значение в диагностике этого инфекционного заболевания.
ПЦР . Из-за высокой чувствительности, специфичности и быстрого получения результатов метод ПЦР вытеснил все другие виды анализов при диагностике инфекции ГВК-1. В случае ПЦР определяются скорее вирусные ДНК, чем вирусные белки. При диагностике ГВК-1 мы использовали ПЦР для определения коротких последовательностей (322 базовые пары) в вирусном гене тимидинкиназы . Это завершалось смешиванием клинических образцов с короткими (примерно 20 базовых пар) праймерами, которые были комплиментарны каждому концу последовательности-мишени, эта реакция происходила при избытке дезоксинуклеотидов и ДНК-полимеразы. Затем образец циклически нагревали, что вызывало денатурацию ДНК-мишени и ее связывание с последовательностями праймеров, в результате происходило продуцирование новых копий ДНК. Таким образом, если в образце было больше одной копии ДНК ГВК-1, то теоретически можно было поставить диагноз. При определении ДНК ГВК-1 с помощью ПЦР можно использовать любые клинические образцы. Чаще всего используют конъюнктивальные смывы и конъюнктивальные и соскобы с роговицы. Поскольку ГВК-1 в основном находят внутри эпителиальных клеток , то для образца нужно как можно большее их количество. Образцы немедленно заливают небольшим количеством стерильного физиологического раствора (1 мл), замораживают и во льду отправляют в лабораторию.
