Обнаружение антитела при иммунологических анализах домашних животных
СЫВОРОТКА. Иммуносорбентные анализы с ферментной меткой ( ELISA ) обычно проводят с целью обнаружения антител в сыворотке. Эти методы анализа могут быть изменены с целью обнаружения специфических классов антител . Методы фиксации комплементов , ингибирования гемагглютинации, нейтрализации сыворотки и агглютинации, как правило, позволяют обнаружить все классы антител в образцах сыворотки. При оценке результатов серологической реакции (сывороточной пробы) важно знать, является ли анализ специфическим для одного или нескольких иммуноглобулинов . Под воздействием чужих антигенов иммунная система вырабатывает сывороточные антитела (гуморальная и иммунная реакции).
Обычно производится анализ следующих специфических антител: иммуноглобулин М ( IgM ), иммуноглобулин G ( IgG ), иммуноглобулин A ( IgA ) и иммуноглобулин Е ( IgE ). У собак и кошек , как правило, сначала вырабатывается IgM, а затем происходит быстрое смещение класса антител в сторону IgG. Сывороточные реакции IgA часто являются отражением реакции IgG ( рис. 4(vet2) ). Положительные титры IgM часто являются подтверждением недавней или активной инфекции, а положительные титры IgG зачастую указывают на более хроническое воздействие специфического антигена.
Животные отличаются друг от друга по своей гуморальной реакции на специфические антигены. Некоторые животные обладают высокой иммунокомпетентностью и вырабатывают большое количество специфического антитела, а у других такой реакции не наблюдается. Таким образом, значение титра антитела не позволяет окончательно судить о том, как давно происходила антигенная стимуляция. В особенности это касается антител класса IgG и реагентов, приводящих к хроническим инфекциям. Например, у многих здоровых кошек , в порядке эксперимента инокулированных Toxoplasma gondii , через 6 лет после последней инокуляции наблюдались титры антител IgG, превышающие 10000.
Увеличение титров антител позволяет говорить о том, что антигенная стимуляция происходила недавно. Однако промежуток времени между первыми положительными результатами и максимальными значениями титров антитела может быть очень коротким. Например, у кошек, инокулированных Bartonella henselae , антитела могут быть обнаружены на 14-й день после инокуляции, а максимальные титры обычно наблюдаются на 21-й день после инокуляции. Если необходимо подтвердить увеличение титров антител посредством иммуносорбентного анализа с ферментной меткой, лучше использовать один и тот же метод анализа, одну и ту же лабораторию, а также анализировать в ходе одного и того же исследования образцы сыворотки, взятые в период обострения и в период выздоровления. Это позволит свести до минимума возможные отклонения.
Некоторые инфекционные заболевания могут вызывать клинические симптомы болезни до появления положительного титра антител, в особенности если проводятся измерения класса антител IgG, например, Ehrlichia canis , вирус иммунодефицита кошек и Rickettsia rickettsii . При обнаружении отрицательных результатов серологического анализа у животных с обострением заболевания, которое может быть связано с испытуемыми реагентами, серологический анализ следует повторить через две-три недели.
Правильный выбор времени для анализа антител имеет очень большое значение при обследовании котят из-за возможности обнаружения антител, передаваемых от матери вместе с молозивом. В большинстве случаев при положительных результатах сывороточной пробы на антитела нельзя считать, что антитела вырабатываются организмом котенка, пока он не достигнет возраста 8-12 недель. Многие из инфицирующих факторов, встречающихся в практике лечения домашних животных, приводят к заражению большого процента популяции и выработке антител в сыворотке, однако индуцируют болезнь лишь у незначительной части инфицированной группы. Примером являются коронавирусы , вирус чумы собак , вирус герпеса 1 , Toxoplasma gondii , Borrelia burgdorferi и Rickettsia rickettsii . Существуют методы анализа, обладающие достаточной аналитической чувствительностью и специфичностью для обнаружения сывороточных антител против этих патогенных факторов. Однако предсказанное значение положительной реакции на болезнь крайне незначительно, поскольку антитела обычно обнаруживают у здоровых животных. Таким образом, диагностическая значимость некоторых сывороточных проб ограничена из-за антител, индуцированных вакцинацией. Примерами являются коронавирусы у кошек, Borrelia burgdorferi, герпесвирус кошек 1 , калицивирус и вирус чумы собак . Поскольку сывороточная проба далеко не всегда означает клиническую стадию многих инфекционных заболеваний, клиницистам не следует торопиться ставить такие диагнозы лишь на основе результатов серологической реакции. Положительный диагноз должен основываться на комбинации данных серологического исследования, типичных данных из истории болезни, характерных клинических и лабораторных данных, подтверждающих болезнь, исключении возможности других заболеваний сходной этиологии, изучении особенностей организма и (или) реакции на курс терапии.
ЖИДКОСТИ ОРГАНИЗМА. Данные о наличии специфически реагирующих на различные факторы антител во внутриглазной жидкости, жидкой части стекловидного тела или спинномозговой жидкости могут быть использованы для подтверждения диагноза инфекции этих тканей. Иммуносорбентный анализ с ферментной меткой является надежным методом для исследований такого типа, поскольку он позволяет легко определить количественные показатели. Результаты исследования антител жидкой части стекловидного тела или спинномозговой жидкости трудно правильно оценить при наличии антител в сыворотке на фоне воспалительного заболевания, поскольку сывороточные антитела попадают во внутриглазную и спинномозговую жидкости в процессе воспаления. Ниже приводится формула для определения количества антител, вырабатываемых локально глазом или центральной нервной системой:
Специфическое антитело внутриглазной или спинномозговой жидкости *
Специфическое антитело сыворотки
Специфическое антитело сыворотки
Общее количество антител внутриглазной или спинномозговой жидкости
Если это соотношение превышает 1, можно предположить, что антитело внутриглазной или спинномозговой жидкости вырабатывалось локально, что соответствует инфекционной болезни глаза или центральной нервной системы.
