Наследственные дефекты эритроцитов у кошек и собак: лабораторная диагностика
Несмотря на то, что признаки, тип и тяжесть анемии и наблюдаемое плейотропное действие могут свидетельствовать о наследственном повреждении эритроцитов, необходим развернутый лабораторный анализ для подтверждения диагноза или обнаружения новых наследственных нарушений. Фактически у некоторых пород было обнаружено более одного морфологического изменения эритроцитов.
Для обнаружения гематологических нарушений и исключения диагноза приобретенной анемии применяются обычные гематологические лабораторные тесты. Следует предположить наличие наследственных изменений в эритроцитах у животных с Кумбс-отрицательной гемолитической анемией, отсутствием проявления токсина или инфекции и адекватной функции почек и печени. Тщательная проверка мазка периферической крови имеет главное значение для установления любого пойкилоцитоза , например, эллиптоцитоза и стоматоцитоза , хотя многие нарушения эритроцитов не вызывают изменений в форме клеток и исторически известны как несфероцитарные гемолитические анемии . Часто отмечают степень ретикулоцитоза , даже в случае дефицита РК , сопровождающегося остеосклерозом , которая бывает пропорциональна уменьшению продолжительности жизни дефектных эритроцитов. Таким образом, исследование костного мозга редко дает новую информацию. Признаки гемолиза могут быть слабыми вследствие его хронического характера и слабой степени. Обычно наблюдаются билирубинурия и билирубинемия. При дефиците PFK имеется низкое содержание гаптоглобина в сыворотке крови, гемоглобинемия или гемоглобинурия, свидетельствующие о внутрисосудистом гемолизе . Некоторые дефектные эритроциты оказываются чрезвычайно хрупкими in vitro, что приводит к искусственному лизису в кровеносных сосудах.
Специальные лабораторные анализы для определения природы внутренних нарушений эритроцитов можно разделить на общие скрининг-тесты, применяемые для характеристики неизвестных нарушений эритроцитов, и специфические скрининг-тесты для характеристики известных нарушений. Оба вида тестов производятся в специализированных лабораториях (например, в лаборатории тестирования генетических заболеваний Жозефины Деблер в колледже ветеринарной медицины при Пенсильванском Университете в Филадельфии).
Тест на осмотическую резистентность эритроцитов, электрофорез протеинов мембраны и изучение ионного транспорта применяются при дефектах мембраны. Различные методы отделения гемоглобина и изменения формы при диссоциации кривой гемоглобина-кислорода могут оказаться полезными для обнаружения новых гемоглобинопатий. И, наконец, недостаток цитозольного фермента определяется путем выявления понижения активности фермента, отсутствия иммунологического материала для перекрестных реакций, нарушения кинетики ферментов, аккумуляции ферментных субстратов и недостатка продукта жизнедеятельности. Например, концентрация эритроцитов DPG понижается при PFK-дефиците , но увеличивается при РК-дефиците у собак. К сожалению, эти тесты занимают много времени, а также требуются специальные инструкции по перевозке и представлению контрольного образца от здорового животного.
Появились молекулярные генетические скрининг-тесты для определения нарушений эритроцитов, вызванных специфическими мутациями. Такие тесты можно применять при наличии каузальной мутации у дефектного гена. Подобные тесты являются мутационно-специфическими, и поэтому они также являются специфическими для данной породы. Это означает, что дефицит одного и того же фермента у различных пород может вызываться различными мутациями. В настоящее время производятся анализы на ДНК при РК-дефиците у кошек абиссинской породы , кошек сомалийской породы , басенджи , а также у вэст хайленд уайт терьера (но не при дефиците РК у других пород) и при PFK-дефиците у английского спрингер спаниеля и американского кокер спаниеля . Подобные тесты, основанные на ДНК, также имеют большую ценность при определении носителей (гетерозиготных), которые являются бессимптомными, но проходят на мутантный аллель.
